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  • 發布時間:2022-02-07 15:50 原文鏈接: 電穿孔的技術簡介

    電穿孔或電滲透是微生物學技術,其中將電場施加到細胞以增加細胞膜的滲透性,從而允許化學品,藥物或DNA被引入細胞。在微生物學中,電穿孔過程通常用于通過引入新的編碼DNA來轉化細菌,酵母或植物原生質體。如果細菌和質粒混合在一起后,質粒可以在電穿孔后轉移到細菌中,盡管取決于正在轉移的細胞穿透肽或CellSqueeze也可以被使用。電穿孔通過在電穿孔比色杯(1.0-1.5kV,250-750V / cm)中傳遞數千伏特穿過1-2毫米懸浮細胞的距離而起作用。之后,細胞必須小心處理,直到它們有機會分裂,產生含有再生質粒的新細胞。這一過程比化學轉化效率大約高出十倍。

    電穿孔對于將外源基因導入組織培養細胞,特別是哺乳動物細胞也是高效的。例如,它被用于生產敲除小鼠的過程中,以及在腫瘤治療,基因治療和基于細胞的治療中。將外源DNA導入真核細胞的過程稱為轉染。電穿孔對于使用電穿孔比色皿轉染懸浮液中的細胞是非常有效的。電穿孔已經被證明有效用于體內組織,用于子宮內應用以及卵內轉染。貼壁細胞也可以被轉染使用電穿孔,為研究人員提供了一種替代方案,在轉染前將其細胞進行胰蛋白酶消化。然而,電穿孔的一個缺點是在這個過程之后,超過7000個基因的基因表達可能受到影響。這可能會導致研究中的基因表達必須控制,以確保準確和精確的結果的問題。

    細胞融合不僅是細胞生物學中一個必不可少的過程,而且作為生物技術和醫學的一種有用的方法。人工誘導融合可用于研究和治療不同的疾病,如糖尿病再生中樞神經系統的軸突并產生具有所需特性的細胞,例如用于癌癥免疫治療的細胞疫苗。然而,細胞融合的第一和最公知的應用是生產雜交瘤技術,其中雜交細胞系(雜交瘤)由融合特異性的產生抗體的B淋巴細胞與骨髓瘤形成的單克隆抗體( B淋巴細胞癌)細胞系。


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