電穿孔轉染真核細胞實驗

哺乳動物細胞

完全培養液 電穿孔緩沖液

電穿孔儀器 電擊池

1.  在完全培養液中培養特轉染細胞至對數生長晚期，4℃ 640 g 離心5 min，收集細胞。

2.  將細胞沉淀用其半量體積的預冷電穿孔緩沖液重懸洗滌，4℃ 640 g 離心5 min。

3.  對于穩定轉染，將細胞以1×10⁷/ml的密度重懸于0℃的電穿孔緩沖液中。對于短暫表達，可用更高密度的細胞。

4.  在冰上放置所需數量的電穿孔用的電擊池，毎池中栘入0.5 ml 細胞懸液。

5.  將DNA加入冰上各電擊池的細胞懸液中。握住電擊池兩側的“窗口”，晃動其底部以混勻細胞懸液，在冰上放置5 min。

6.  將電擊池放入電穿孔裝置的架上用所設定的電壓及電容值電擊一次或多次。

7.  將電擊池置于冰上10 min。

8.  用非選擇性完全培養液20倍稀釋被轉染的細胞，并用該液洗電擊池以移出所有的被轉染細胞。

9.  對于穩定轉染，在非選擇培養液中培養細胞48h （大約2代），然后轉入含有抗生素的 培養液中。

10.  對于短暫表達，培養細胞50~60 h 后，收集細胞進行短暫表達分析。