電鏡樣品科普貼：常見樣品制備技術

  電鏡樣品制備技術較復雜，種類也較多，分為普通樣品制備技術和特殊樣品制備技術。這里簡單介紹幾種常用的樣品制備技術。

  1、超薄切片技術

  超薄切片技術（ultramicrotomy）是透射電鏡樣品制備方法中最基本的一種。由于電子束穿透能力的限制透射電鏡觀察的樣品必須很薄，普通光鏡切片厚度約3～5μm，而透射電鏡切片厚度則要求在50～80nm左右。這種薄切片稱為超薄切片。超薄切片技術包括：取材、固定、脫水、浸透、包埋、切片及染色。

  電鏡樣品采用戊二醛和鋨酸雙重固定，用酒精或丙酮脫水，環氧樹脂進行包埋， 超薄切片機切片，采用重金屬如鈾和鉛進行染色以增加細胞結構間的反差。

  2、負染色技術

  負染色技術（nagtive stain technique）又稱陰性染色，是透射電鏡樣品制備技術中的一種。此技術是指通過重金屬鹽在樣品四周堆積而加強樣品外周的電子密度，使樣品顯示負反差，襯托出樣品的形態和大小。常用的重金屬有磷鎢酸鈉、醋酸鈾等。

  負染色技術主要用于細菌、病毒、噬菌體等微生物大分子結構、亞細胞碎片以及分離的細胞器等研究工作。負染色樣品不需經過固定、脫水包埋和超薄切片等復雜操作，而是直接對沉降的樣品勻漿懸浮液進行染色。

  3、冷凍蝕刻技術

  冷凍蝕刻技術（freeze-etching technique）又稱冷凍復型，是透射電鏡樣品制備技術的一種，是將樣品經快速冷凍→斷裂→升華→噴鉑→噴碳而最終形成一層印有生物樣品斷裂面立體結構的復型膜，然后將生物樣品腐蝕掉，用銅網將復型膜撈起進行透射電鏡觀察。

  冷凍蝕刻技術能保持細胞原來的結構，立體感鮮明，主要用于生物膜的研究。

  4、掃描電鏡樣品制備技術

  掃描電鏡適合于研究生物樣品的表面特征，樣品制備包括觀察面的暴露、固定、脫水、干燥和導電等。 樣品制備采用戊二醛和鋨酸雙重固定；乙醇或丙酮脫水。干燥是掃描電鏡樣品較 重要的步驟。由于生物樣品柔軟多水，大多數的組織含水量在80%以上，采用自然干燥，會受表面張力影響使細胞表面收縮，形態改變。所以多采用液體CO2臨界點干燥法，在臨界狀態時表面張力系數為零，也就是分子的內聚力等于零時干燥，細胞不再收縮，保持了原有的形態。由于干燥樣品不導電，因而需要在樣品表面鍍一層薄薄的金屬膜使樣品導電并增加圖像的反差和立體感。