病原微生物染色實驗——乙型肝炎表面抗原

乙型肝炎表面抗原（HBsAg）是由多肽組成的脂蛋白，由于抗原內含有豐富的二硫鍵成分，經過氧化劑而轉變為磺酸，然后再與染色液產生較強的親和力進行著色。通過地衣紅（Orcein）染色法，能夠較好地顯示乙型肝炎表面抗原（HBsAg）。

石蠟組織切片

二甲苯無水乙醇中性樹膠蒸餾水地衣紅高錳酸鉀乙酸濃鹽酸草酸

滴管

地衣紅染色液：地衣紅 1 g，70％ 乙醇 95 ml，濃鹽酸 5 ml。充分溶解后，調 pH 值為 1.2～1.6 即可。

酸性氧化液：高錳酸鉀 0.5 g，鹽酸 0.15 ml，蒸餾水 10 ml。

草酸溶液：草酸 2 g，蒸餾水 100 ml。

1. 石蠟組織切片，常規脫蠟至水。

2. 酸性氧化液處理 5 min。

3. 自來水洗后用草酸溶液漂白 5 min。

4. 蒸餾水洗 3 次。

5. 浸入 70％ 乙醇中 2 min。

6. 浸入地衣紅染色液中 5～10 h（對新配制成的染色液，以及室溫 15℃ 以下時還可適當延長時間）。

7. 直接用 95％ 乙醇分化至陽性物質清晰為止。

8. 無水乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封固。

1. 酸性氧化液不能存放時間較長，防止失去氧化作用。

2. 地衣紅染色用于肝穿刺時，必要時可用對照片（陽性）進行染色。

結果：乙型肝炎表面抗原陽性物質呈棕色。