實驗方法原理
實驗材料 待檢測病毒
試劑、試劑盒 丙酮0. 01mol L PBS95%乙醇二甲苯
儀器、耗材 玻片
實驗步驟
1. 培養細胞小玻片標本的制備 根據所檢測病毒種類，選擇敏感細胞進行培養，如乙型肝炎病毒用乳地鼠腎細胞 (BHK21 細胞）培養，森林腦炎病毒用綠猴腎細胞 (Vero 細胞）培養，登革熱病毒用白紋伊蚊傳代細胞 (C6/36 細胞）培養。
按細胞培養方法，將其分裝在有蓋玻片的培養板或培養瓶中，置 37℃溫箱培養成單層細胞，然后接種病毒。接種病毒量及培養時間因病毒種類而異。
如乙型肝炎病毒接種的病毒滴度為約 10-5, 培養 24 h 收片；森林腦炎病毒接種的病毒滴度為 10-6 ,24 h 收片；登革熱病毒接種的病毒滴度為 10-6,48 h 收片。
設未接種病毒的正常細胞作對照。感染和對照標本從培養板或培養瓶中取出后用 0. 01mol/L PBS 漂洗 2 次，放濾紙上，干燥后放預冷丙酮中置- 30~-28℃冰箱中固定 30 min, 取出小片，室溫干燥后裝小瓶密封，置 4℃冰箱保存備用。
2. 鼻咽部上皮細胞涂片制備。患者先排凈鼻咽部分泌物后，將蘸有生理鹽水的鼻咽拭子順下鼻道插入，擦拭鼻咽處或咽部扁桃體周圍及前后咽壁，盡量獲取上皮細胞，然后向清潔載玻片上輕壓棉拭子，制成薄而均勻的涂片。每標本作 4-5 片，放室溫晾干后，滴加冷丙酮置 4℃冰箱中固定 10 min, 室溫下干燥后，置 4℃冰箱保存或立即染色檢測。
3. 石蠟切片標本的制備從放血處死的小白鼠或尸檢材料中，取鼠腦或其它組織材料，切3-4mm 小片，置 95% 乙醇中 4℃固定 24 h 。在 4℃下經無水乙醇 I、II容器內順次脫水，每容器1 h 。再用二甲苯浸 15-30 min 至透明為止。將組織塊放 56℃浸蠟 30 min, 制成蠟塊，切片厚度為 6-8 μm。經二甲苯脫蠟， 95% 乙醇脫去二甲苯，再染色。具體方法同病理組織切片制備。蠟塊可保存一年，經熒光染色仍保持抗原性和著色力。
4. 冰凍切片標本制備 將上述小白鼠按需要選擇部位或尸檢材料，切厚度為 3-5mm 小塊，放冰凍切片機冷凍臺上，用普通漿糊作支持物作冷凍切片，厚度為 4-7μm, 夏季室溫超過20℃以上可用 60 g/L 明膠作支持物，也可將切片機置于 4℃臥式低溫冰箱中進行。玻片粘片后立即放丙酮中，室溫固定 10-15min, 即可熒光染色。
5. 鼠腦及尸檢材料印片制備
(1) 熱印片法：將載玻片通過酒精燈火焰數次，待溫度達 40℃左右時取腦組織輕輕印片，放室溫干燥，在室溫中用丙酮固定 10 min, 即可進行染色。
(2) 冷印片法：將載玻片放-20℃低溫預冷，也可采用乙醇加二氧化碳干冰降溫。將材料迅速印片，立即放入干燥缸中干燥后，置丙酮中固定 10 min, 即可染色。
收起
注意事項
（一）病毒染色標本的制備 標本的制作要求維持完整的抗原成分，細胞形態學變化盡可能小，抗原所在位置盡可能不變，不溶解擴散，不脫落。
（二）固定病毒標本所選用的固定劑應以既具有改變細胞膜的通透性使熒光抗體通過細胞膜與細胞內抗原結合又不破壞病毒的抗原性為原則，通常采用冷丙酮。
（三）標本在固定前一定要徹底吹干，否則在以后的操作步驟中，標本易脫落。
（四）沖洗時應使水流到標本上方，再流經標本，防止標本從玻片上脫落。