病毒必須在易感的活細胞內才能增殖,因此,根據不同病毒選擇敏感動物,離體組織細胞和雞胚進行分離培養。
| 實驗方法原理 | 雞胚培養方法操作簡便,適用于流感病毒,痘病毒,皰疹病毒和腦炎病毒等的培養。最常用的雞胚接種方法有四種,即絨毛尿囊膜接種法,羊膜腔(羊水囊)接種法,尿囊腔接種法和卵黃囊接種法。根據不同病毒和不同目的采用適宜的接種方法。 |
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| 實驗步驟 | 1. 雞胚的檢查
將9~11 日齡雞胚置于檢卵器上,照視觀察雞胚是否生活,根據①小血管是否清晰;②胚胎是否活動,觀察小雞的眼睛黑點是否移動。如果雞胚不動,血管昏暗模糊,變黑或蒼白都表示已死亡。
2. 接種
用鉛筆標明天然氣室及雞胚位置,然后在絨毛尿囊膜發育區〈照視時呈現紅色〉近胚位處的氣室邊緣作一記號,定為注射入口。
用碘酒消毒注射入口和天然氣室端的蛋殼,再用電鉆,口腔科用牙鉆和小銼刀,于注射入口和天然氣室端的蛋殼上鋸一小孔,勿傷及卵膜。
用大頭針通過火焰消毒后刺穿氣室端所開小孔的卵膜,這樣可避免在注射時液體回流出來。
將雞胚橫臥于蛋架上,用無菌l 毫升注射器抽取病毒液體,針頭與卵殼成30(交角,由注射器小孔剌入0.5~1.0 厘米,注0.1~0.2 毫升。
注射完畢,用膠布封口,封口前膠布用碘酒消毒,并通過火焰燒去余碘,用過的注射器用煮沸法消毒,雞胚放入35~37 ℃培養。
注射后次日,逐日觀察雞胚生活情況,孵育48~72小時后移入4℃冰箱過夜。注意雞胚必須直立,令氣室端朝上。
收獲尿囊液之前取出雞胚,用碘酒消毒氣室端,并將鑷子擊破氣室端卵殼,沿氣室邊緣小心打開一大缺口,然后用小鑷子撕去卵膜及撕破絨毛尿囊膜,最后用毛細管吸取尿囊液,一般可吸得4~5 毫升。
滴定尿囊液的病毒血凝效價。
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| 注意事項 | 尿囊接種法適用于某些呼吸道病毒如流感,副流感,新城雞瘟等病毒之培養,唯分離培養不如羊膜腔接種法的陽性率高。 |
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