病毒透射電鏡病毒標本制備實驗2

病毒

負染色液

透射電鏡

負染色法主要有兩種：

(1) 懸滴法：用一根細滴管或結核菌素注射器吸一滴標本懸液滴在有膜的銅網上，如帶膜銅網已從濾紙上取下，則此銅網很可能被吸到加標本的吸管頭上或注射器針頭上，銅網上也可能被翻轉而污染，故采用懸滴法時，應將帶膜銅網粘附于濾紙上，切不可取下。銅網滴上標本后靜置片刻，然后用濾紙從銅網邊上吸去多余的標本懸液，未待標本干燥即滴上負染色液。染色 1~2 min, 用濾紙吸去多余染液，再用蒸餾水滴在銅網上洗 1~2次，再用濾紙吸去水分，待干后用電鏡觀察。

(2) 漂浮法：漂浮法是將有膜的銅網的膜面覆蓋漂浮于標本懸液上。具體方法是先將濾紙在加溫熔化的液體石蠟中浸漬后取出，干后即成帶蠟濾紙。用吸管吸取標本懸液滴于蠟濾紙上，將帶膜銅網覆蓋其上， 1~2 min 后用鑷子夾起銅網，用濾紙吸去多余的標本懸液，在另一蠟紙上滴一點負染色，將吸有標本的銅網膜面向下漂浮于負染色液滴上，染 1~2 min, 用鑷子夾起銅網，用濾紙吸去多余的染液，待干后用電鏡觀察。

負染色技術已是當代電鏡生物標本制備中一項應用普遍、效力較高而又比較簡便的技術，尤其在病毒學研究中，對揭示病毒的形態結構十分有效，對病毒學的發展起了較大的作用。

負染色方法有如下突出的優點：明顯提高了標本的反差和分辨力。簡便易行，不要求高純度的標本制備。染色本身不改變生物標本的活性，不因染色而造成標本變形。