癌基因轉化細胞：基因組DNA轉染法

實驗概要

 癌基因轉化細胞

實驗步驟

1．提取基因DNA（含癌基因）。

2．DNA準備：取供體DNA50～100微克，加3M NaCl或醋酸鈉使最終濃度至0.3M混勻。

3．再加2倍體積無水乙醇，3000轉/分離心10分鐘，去上清。

4．加入轉染緩沖液，待DNA充分融解后，再加入2.5M CaCl₂，令最終濃度為125mM，用吸管輕輕吹打三次。置室溫下10～30分鐘，待液體透明度降低，出現微濁藍色時，即可用于轉染受體細胞。

5．細胞：取生長狀態良好、處于半匯合階段的指數增生期細胞，在轉染前24小時，更換培養液1次。

6．轉染：向每瓶中加DNA－磷酸鈣沉淀物0.5～1ml/瓶，置37℃作用4～6小時。

7．培養：棄去培養液，用15％甘油處理3分鐘，無血清培養漂洗1次，加入新培養液，37℃溫箱培養24小時。

8．傳代：按1：5或1：10分瓶傳代，每2～3天換液1次，接近匯合時血清用量降至5％，培養2～3周。

9．檢測：逐日觀察，待出現轉化灶后，分離入另瓶中培養。