白細胞的純化操作方法

1．低滲處理法

        【試劑及配制】

        （1）蒸餾水

        （2）1.8%氯化鈉溶液

        【操作方法】

        （1）上述各種方法所得白細胞懸液中加入1ml蒸餾水，輕輕地震蕩20s，使混雜的紅細胞裂解；

        （2）加等量1.8%氯化鈉溶液，調至等滲；

        （3）再加Hank’s溶液混勻，離心沉淀，反復兩次;

        （4）取末次沉降細胞配成所需濃度的白細胞懸液。

         2.氯化銨處理法

        【試劑及配制】

        （1）Gey溶液母液A： 稱取35.0g NaCl, 1.85g KCl, 1.5g Na2HPO4.H2O，0.119g KH2PO4，5.0g 葡萄糖，和50mg 酚紅，并將上列各物溶于1000ml蒸餾水中，10磅高壓蒸汽滅菌15min。如果用NH4Cl 35.0g代替NaCl，補優質明膠5g，即為溶血用的Gey溶液的母液A。

        （2）Gey溶液母液B：稱取0.42g MgCI2.6H2O，0.14g MgSO4.7H2O，O.34g CaCl2，并將上列各物溶于100ml蒸餾水中，10磅高壓蒸汽滅菌15min。

        （3）NaHCO3溶液：稱取2.25g NaHCO3,溶于100ml蒸餾水中，10磅高壓蒸汽滅菌15min。

        （4）Gey應用液：取母液A 20ml,蒸餾水70ml及母液B 5ml，混合后加NaHCO3溶液5ml即成。

        【操作方法】

        （1）在白細胞懸液中加入含氯化銨的Gey應用液1ml，輕搖2min，使紅細胞裂解；

        （2）加入等量的不含氯化銨的Gey應用液，離心，取沉淀細胞配成白細胞懸液。

        【注意事項】

        用上述諸法所得細胞懸液，含有較多粒細胞、單核細胞和血小板，而淋巴細胞純度約為60～67%。