白血病免疫學

白血病免疫學

第一節       白血病細胞的抗原及相應抗體

白血病細胞的免疫學檢查主要是檢測白血病細胞的免疫表型。即用特異的抗體檢測白細胞的核、漿或膜上的抗原。是MIC分類中不可缺少的一部分。白血病細胞的抗原可以分為兩類：一類是正常細胞系所具有的抗原，它在正常細胞分化發育過程中出現或消失；另一類是與細胞功能狀態有關的抗原。還有少數特殊的腫瘤性質的抗原。

一、血細胞的種系和分化抗原

在臨床應用中較普遍的有：

（一） 幼稚細胞

1 HLA-DR  抗原屬于組織親和性復合物Ⅱ。單抗來自不同的克隆而有不同的名稱：如Q5/13、LN3、TAL.1B5(α)、DK22（β）。亦稱為Ia。出現在多能干細胞最初分化階段的B系淋巴細胞和髓系細胞，正常T系淋巴細胞不表達（但激活的T細胞可表達）。此種單抗可用于福爾馬林固定的組織，一般不需要作抗原修復（但DK22僅能用于涂片）。

2 末端脫氧核苷轉換酶（TDT）  單抗來自克隆HT-1、3、4、6。抗原存在于前體T和B淋巴細胞，抗體與細胞核反應。作為急性淋巴母細胞白血病的標記，陽性率可達90%以上。免抗體可用于石蠟切片（須微波處理）。計數100個腫瘤細胞，多于10%的細胞表達作為陽性。

（二） B系淋巴細胞

1 CD19  單抗來自克隆HD37，作為檢測全B抗原的標志之一，在早期細胞即出現，直到漿細胞仍有反應，但多數骨髓瘤細胞喪失此抗原性，只能在涂片中檢測。

2 CD20（或CD20cy）  抗原是分子量為33000-37000的糖蛋白，有3個疏水區，4次穿越細胞膜，抗原決定簇位于胞漿內部分，其基因位于11號染色體的長臂12-13.1。來自克隆L26，抗體與正常或腫瘤細胞漿內的抗原反應，是檢測全B細胞最常用的抗體，能應用于福爾馬林固定的組織，不需要修復抗原，與CD3合并用于初步區別T和B淋巴細胞。

3 CD21  亦稱補體受體2（CR2），是一個145000λⅠ型膜糖蛋白，是補體C3d的受體，抗體來自克隆1F8或鵝多抗。在B細胞活化和增殖中起作用。成熟B細胞中的表達，只能在涂片中檢測。石蠟切片并經特殊的熱處理修復抗原檢測到的是濾泡內的樹突細胞。

4 CD22  來自克隆4KB128或To15。是全B細胞抗體，用于檢測正常及腫瘤性B細胞，兩種抗體都只能用于涂片。

5 CD23  抗原為45000膜糖蛋白。抗體來自克隆MHM6，成熟B淋巴細胞、單核細胞、嗜酸性細胞、血小板和樹突細胞均表達。

6 CD24  抗體來自克隆SN3，抗原為35000-45000膜涎糖蛋白。在前B、早B和成熟B細胞中表達，在激活B細胞中表達降低，在粒細胞中也有存在。漿細胞中不存在。它在B細胞分化和增殖中起作用。

7 CD79α  CD79是一個二聚蛋白質，分子量約70000，有2個多肽鏈，分別稱為CD79α和CD79β。前者的基因位于19號染色體q13.2-13.3，后者的基因位于17號染色體q23，來自克隆JCB117是CD79α的抗體，以往稱為Iga，來自克隆HM57的抗體作用于抗原的細胞內區。前一個抗體可顯示B細胞腫瘤的細胞外區表達的抗原分子，用于涂片和常規切片，但不能用于流式細胞儀檢測。

8 免疫球蛋白（Ig）  抗人Ig的抗體有許多，分別與IgA(克隆6E2C1)、IgA的α鏈（兔多抗）、IgA、IgG、IgM的κ、λ（免多抗）、IgD（克隆IgD26）、IgD的δ鏈（免多抗）、IgE（克隆CIA-E-7、12，和E1）、IgEε鏈（免多抗）、IgG（克隆A57H）、IgG的γ鏈（免多抗）、IgG的CH2區（免多抗）、IgM（克隆R1/69）、IgM的μ鏈（免多抗）等，均可用于涂片和福爾馬林固定的組織，但后者須經過抗原修復，免疫蛋白出現于B細胞胞漿(cyIg)早于細胞膜(smIg)，因此需區別胞漿陽性和膜陽性。

（三） T系淋巴細胞

1 CD2  亦稱為E-玫瑰花受體，是分子量50000的跨膜蛋白，與CD58細胞外區的氨基端作用參與細胞粘附，促進T細胞活化，在T淋巴細胞、NK細胞和胸腺細胞中表達，單抗克隆為MT910，只能用于涂片，用作全T細胞抗體。

2 CD3  含5種多肽鏈，形成三種二聚體，各種單抗抗各個多肽。單抗有克隆T3-4B5和UCHT-1，只能用于涂片，免多抗（對CD3ε鏈）可用于福爾馬林固定的組織（須經過抗原修復），用于檢測正常和腫瘤性T細胞。

3 CD4/CD8  CD4亦稱T4或Leu3，是分子量55000膜糖蛋白，含4個免疫球蛋白樣區域，表達在T輔助細胞。CD8亦稱T8或Leu2，是32000-34000細胞表面糖蛋白，表達在T毒性細胞。CD4單抗克隆為MT310，僅用在涂片。CD8單抗有兩種：克隆DK25只能用于涂片。克隆C8/144B可用于福爾馬林固定組織，但需修復抗原。CD4和CD8同時出現在一個T細胞，或一個T細胞沒有CD4或CD8表達，均強烈提示為腫瘤性細胞。

4 CD5  是一個分子量67000Ⅰ型跨膜蛋白，70%正常外周血淋巴細胞表達CD5，事實上所有胸腺細胞與外周血T細胞均表達CD5。單克隆DK23（僅能用于涂片），克隆CD5/54/F6可用于福爾馬林固定組織，（用微波修復抗原）但其結果不及涂片。95%正常人的T細胞表面有此抗原，B細胞淋巴瘤（中心細胞性）和慢性淋巴細胞白血病（B細胞性）亦表達。少數正常B細胞亦可表達。

5 CD7  是一個分子量40000Ⅰ型跨膜糖蛋白，表達于多能干細胞，多數人胸腺細胞及外周血T淋巴細胞。抗體用于檢測T細胞性白血病。單抗克隆為DK24，僅能用于涂片。

6 CD10  亦稱普通急性淋巴母細胞性白血病抗原（CALLA），是分子量100000Ⅱ型跨膜糖蛋白，出現在早期B和T前體細胞，B母細胞和一些粒細胞。單抗克隆為SS2/36，為急性淋巴母細胞性白血病的特異性抗體，對大多數其他類型的白血病均呈陰性。抗體只能用于丙酮固定的涂片。

（四）髓系細胞

1 CD11b  即C3b受體，亦稱Mo1或OKM1。單抗克隆為2LPM19c。出現于粒細胞分化的后期和單核系細胞。抗體與單核細胞性白血病反應，少數急性粒細胞白血病細胞亦起反應。

2 CD13  或稱MY7，來自克隆WM47。亦即氨基肽酶N，為分子量150000Ⅱ型跨膜糖蛋白，出現在大多數髓系細胞，包括單核細胞、嗜堿性粒細胞、嗜酸性粒細胞、中性粒及粒系白血病。

3 CD14  或稱MY4，來自克隆TUK4，是一個分子量55000的膜糖蛋白，表達在單核細胞、巨噬細胞及一部分粒細胞。它是脂多糖受體，脂多糖激活它而使巨噬或單核細胞分泌細胞因子。

4 CD15  來自克隆C3D-1，亦稱粒細胞相關抗原，抗體與LewisX單糖反應，后者出現在成熟粒細胞和R-S細胞。

5 CD33  亦稱MY9，為分子量67000Ⅰ型跨膜糖蛋白，出現在骨髓粒和巨噬系的前體細胞，但多能干細胞卻缺如。外周血單核細胞也表達。是一種涎酸依賴的細胞粘附分子。用以鑒別髓系和淋巴、紅白血病。抗體來自克隆WM-54。

6 CD34  來自克隆QBEnd/10，亦稱MY10，是分子量105000-120000跨膜糖蛋白，在造血祖細胞中表達，它的胞漿區是磷酸化的靶，在信號傳遞中起作用。

7 髓過氧化物酶（MPO）  單抗來自MPO7克隆。標記粒和單核細胞胞漿內的酶顆粒。但它與細胞化學顯示的過氧化物的結果可不一致，因后者顯示其功能，而單抗檢測的是其抗原性，在腫瘤細胞中，二者可呈分離。

8 髓細胞/組織細胞抗原  單抗來自克隆MAC387，標記粒細胞及單核細胞。

9 中性粒細胞彈力酶  抗體來自克隆NP57，能與中性粒細胞及多數單核細胞起反應，可用于血、骨髓涂片及福爾馬林固定的石蠟切片。

10 CD68  是一組酸性、溶酶體糖蛋白。它出現在胞漿內的顆粒，也可在巨噬細胞、單核細胞、中性粒細胞、嗜堿性粒細胞及大淋巴細胞表面檢出，它具水解功能，是溶酶體膜的主要成分。單抗來自克隆EBM-11（僅能用于涂片）、KP1和PG-M1，PG-M1特異的針對單核和巨噬細胞，對粒細胞無反應。

（五）其他

1 巨核細胞標記抗體  CD42b為血小板糖蛋白Ⅰb、克隆為AN51。CD41為血小板糖蛋白Ⅱb，克隆為5B12，CD61為血小板糖蛋白Ⅲλ，克隆為Y2/51。

2 紅系細胞標記抗體（GlycophorinA或C）  單抗分別來自克隆JC159和Ret40f，能與大部分紅白血病細胞起反應

3 漿細胞標記抗體（CD38）  克隆為AT13/5，不單出現在漿細胞，早期B系及T系細胞和激活的B和T細胞均表達。90%CD34+細胞表達CD38。

另一個來自VS38c克隆的單抗，僅對漿細胞內糙面內質網相關的P63蛋白反應。還有CD138為分子量30500的細胞表面蛋白質，抗體來自克隆M1 15。

4 自然殺傷細胞抗體

（1）CD56：來自克隆MOC-1或T199；

（2）CD57：來自克隆HNK-1；

（3）CD94：來自克隆HP-3D9。

二、白血病的免疫分型

按照正常白細胞的發育、分化和成熟的過程，許多抗原在這個過程的不同時期中出現（表達）和消失。根據不同的抗原出現和消失，決定白細胞的分化階段。在正常白細胞分化過程中，常規染色的形態，細胞化學的反應與表達的抗原是一致的。

白血病細胞是腫瘤性的增生，它的分化、成熟與正常的分化是有差異的，可稱之為“歧途分化”。因此，在白血病細胞的形態、細胞化學反應的免疫表型可以是不一致的，或可稱為是“分離”的。還有，腫瘤細胞由于有基因的突變、融合或插入等異常，因而腫瘤細胞可喪失其來源細胞的抗原簇，也可“獲得”它原來沒有（不表達）的抗原簇，而與相應的抗體反應，如白血病細胞表達上皮性抗原——角蛋白。

根據白血病細胞的免疫細胞化學反應，進行的分型即白血病的免疫分型，是白血病治療、用藥根據之一，是國際交流必不可少的檢查之一。為此，開展免疫分型號已經是血細胞檢查的常規方法。但是，各實驗室還得根據實際情況選擇適當的抗體。

（一）淋巴細胞性白血病

1急性淋巴細胞性白血病  相應的細胞發育階段為淋巴母細胞，其免疫標記特點為TdT陽性，這是作為與髓系干細胞區別的要點（后者TdT陰性）。區別T系和B系的母細胞則依賴于HLA-DR（Ia）；B系陽性而T系陰性（注意：HLA-DR在髓系干細胞呈陽性）。其次CD19出現在早期B系細胞，也可作為區別T系和B系細胞的標志。CD7出現在早期T系細胞，它雖不存在于B系細胞，但一部分急性非淋巴白血病細胞亦可表達，需加注意，因此須與其他抗體同時應用，綜合考慮。

2慢性淋巴細胞性白血病  經典的慢性淋巴細胞白血病多數是B系細胞，瘤細胞有B系相關抗原（CD19、CD20、CD79α）。表達CD5+、CD23+、CD43+；CD11c+/-；但CD10陰性。少數為T系細胞，表達CD7+和其他T細胞相關抗原（CD2，3，5陽性）；多數CD4+，有些CD4、CD8均陽性，極少數CD4、CD8均陰性，而CD25陰性。

3非典型慢性淋巴細胞白血病及淋巴瘤并發白血病  慢性淋巴細胞性白血病的特征標志是CD5+和CD23+，若這二者均陰性，則為非典型慢性淋巴細胞白血病。其中主要的是前B細胞性白血病。淋巴瘤并發白血病者，瘤細胞的免疫表型與原發灶中的基本相同。

4多毛細胞性白血病  瘤細胞的免疫表型為sIg+、B細胞相關抗原（CD19、CD20、CD22、CD79α）陽性；CD5、CD10、CD23均陰性，CD11c和CD25強陽性，FMC7和CD103陽性，這個標志的陽性意義最大，但前三者亦可出現在多毛細胞白血病之外的情況。

5漿細胞性白血病  多數sIg陰性而cIg陽性，B細胞相關抗原多數陰性，但CD79α可呈陽性。漿細胞特異性抗體和CD38陽性。

6大顆粒淋巴細胞性白血病（T細胞或NK細胞）  兩種白血病細胞的免疫表型分別為：T細胞型：CD2+、CD3+、CD5+、CD7+、TcRαβ+、CD4-、CD8+、CD16+、CD56-、CD57+/-、CD25-；NK細胞型：CD2+、CD3-、TcRαβ-、CD4-、CD8+/-、CD16+、CD56+/-、CD57+/-。

（二）非淋巴細胞性白血病

髓系細胞抗體反應與急性非淋巴細胞性白血病M1-M7之間的關系如下表：

表4-1  急性非淋巴細胞白血病免疫分型

抗體

M1

M2

M4

M5

M3

M6

M7

HLA-DR

+

+

+

+

-

+/-

+/-

CD34

+

+/-

+/-

+/-

-

-

+/-

CD33

+

+

+

+

+

+/-

+/-

CD13

+/-

+

+

+

+

-

無報道

CD11

-

+

+

+

+/-

-

無報道

CD15

-

+

+

+

+/-

+/-

無報道

CD14

-

+/-

+

+

-

-

無報道

血型糖蛋白

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-

-

+

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血小板GPⅡb/Ⅲa/Ⅰb

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-

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+

急性早幼粒細胞白血病細胞與PML抗體反應。

慢性粒細胞性白血病，一般表示髓系標記抗原MY9（CD33），還可表示ABL/BCR融合基因產生的蛋白質抗原。

（三）雙系和雙表型白血病

白血病同時有淋系和髓系標記抗原的瘤細胞為雙系型白血病。

同一個白血病細胞表達淋系和髓系抗原者稱為雙表型白血病。目前“確認”的系限表達標志（lineage-restricted markers）為：（1）粒系：過氧化物酶、CD34、CD13；（2）單核系CD34、CD13、CD14；（3）紅系：血型糖蛋白；（4）巨核系：血小板糖蛋白；（5）B細胞系：表面或胞漿免疫球蛋白，CD19、CD20；（6）T細胞系：CD5、CD3、CD2、CD7。CD57常在慢性B淋巴細胞白血病表達，不認為雙表達。CD2和CD7在少數急性非淋巴細胞白血病細胞中表達亦不認為是雙表達。

此外，還有一種在白血病治療和病程進展過程中，白血病細胞免疫表型發生轉變，稱為細胞系轉變型。