目的基因的獲取方法主要有以下2類
(1)已知基因的獲得 PCR分離法和化學合成法等
(2)未知基因的獲得 直接分離法和基因文庫分離法等
直接分離法
1、限制性內切酶法
用限制性內切酶把基因組DNA切成不同大小的片斷
應用對象 適合于從簡單的基因組中分離目的基因 如質粒或病毒的大小只有幾千堿基 大的也超不過幾十萬堿基 編碼基因比較少 獲得也比較簡單
(1)對已定序列的DNA分子 只需要用已知識別序列的限制內切酶進行一次或幾次切割 分離純化所需要的DNA片斷 與適當載體連接
(2)對已知定位的目的基因 只要根據目的基因兩側的已知的酶切識別位點 一次就可以獲得
(3)即使含目的基因的DNA分子未定序或定位 也只須通過酶切分析 隨后再通過部分酶切 構建一個簡單的基因文庫 從鉤出目的基因