色譜柱是運用于色譜儀系統中起著分離作用的儀器，是色譜儀分析系統的核心部件，色譜柱柱效的高低影響著檢測速率的快慢以及檢測結果的準確性。為了提高色譜柱的柱效，保證液相色譜儀分析檢測的靈敏性，正確使用和維護色譜柱十分重要，稍有不慎就會降低柱效、縮短使用壽命甚至損壞。在色譜操作過程中，需要注意下列問題。
1、避免壓力和溫度的急劇變化及任何機械震動。溫度的突然變化或者使色譜柱從高處掉下都會影響柱內的填充狀況；柱壓的突然升高或降低也會沖動柱內填料，因此在調節流速時應該緩慢進行，在閥進樣時閥的轉動不能過緩(如前所述)。
2、應逐漸改變溶劑的組成，特別是反相色譜中，不應直接從有機溶劑改變為全部是水，反之亦然。
3、一般說來色譜柱不能反沖，只有生產者指明該柱可以反沖時，才可以反沖除去留在柱頭的雜質。否則反沖會迅速降低柱效。
4、選擇使用適宜的流動相，尤其關注流動性pH。由于流動相的PH控制不當而對色譜柱造成損害，通常很難是色譜柱恢復，因此必須認真對待，嚴格控制流動相的PH值。有時可以在進樣器前面連接一預柱，分析柱是鍵合硅膠時，預柱為硅膠，可使流動相在進入分析柱之前預先被硅膠"飽和"，避免分析柱中的硅膠基質被溶解。
5、去除樣品和流動相中的固體顆粒。樣品和流動相中含有的固體顆粒物質會堵塞色譜柱篩板，篩板被堵不僅會引起柱壓上升，而且也會引起柱效下降，因為篩板的堵塞會引起液流不均，導致色譜峰形拖尾、變寬，甚至出現雙峰，從而使柱效下降。因此，建議使用超純水很色譜純試劑，在分析前對樣品進行超聲，針筒過濾，流動相過0.45μm 濾膜，尤其是流動相加入了緩沖鹽（NaH2PO4等），必須過濾。
6、經常用強溶劑沖洗色譜柱，清除保留在柱內的雜質。在進行清洗時，對流路系統中流動相的置換應以相混溶的溶劑逐漸過渡，每種流動相的體積應是柱體積的20倍左右。
7、保存色譜柱時應將柱內充滿乙腈或甲醇，柱接頭要擰緊，防止溶劑揮發干燥。絕對禁止將緩沖溶液留在柱內靜置過夜或更長時間。
8、色譜柱使用過程中，如果壓力升高，一種可能是燒結濾片被堵塞，這時應更換濾片或將其取出進行清洗；另一種可能是大分子進入柱內，使柱頭被污染；如果柱效降低或色譜峰變形，則可能柱頭出現塌陷，死體積增大。在后兩種情況發生時，小心擰開柱接頭，用潔凈小鋼將柱頭填料取出1-2mm高度(注意把被污染填料取凈)再把柱內填料整平。然后用適當溶劑濕潤的固定相(與柱內相同)填滿色譜柱，壓平，再擰緊柱接頭。這樣處理后柱效能得到改善，但是很難恢復到新柱的水平。柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前裝一根與分析柱相同固定相的短柱(5-30mm)，可以起到保護、延長柱壽命的作用。采用保護柱會損失一定的柱效，這是值得的。通常色譜柱壽命在正確使用時可達2年以上。以硅膠為基質的填料，只能在pH2-9范圍內使用。柱子使用一段時間后，可能有一些吸附作用強的物質保留于柱頂，特別是一些有色物質更易看清被吸著在柱頂的填料上。
9、新的色譜柱在使用一段時間后柱頂填料可能塌陷，使柱效下降，這時也可補加填料使柱效恢復。每次工作完后，最好用洗脫能力強的洗脫液沖洗，例如ODS柱宜用甲醇沖洗至基線平衡。當采用鹽緩沖溶液作流動相時，使用完后應用無鹽流動相沖洗。含鹵族元素(氟、氯、溴)的化合物可能會腐蝕不銹鋼管道，不宜長期與之接觸。裝在HPLC儀上柱子如不經常使用，應每隔4-5天開機沖洗15分鐘。
10、正確使用緩沖鹽。緩沖鹽可以提供離子平衡反離子，并使流動相保持一定的離子強度和配PH值，減少拖尾。緩沖鹽通常易溶于水，難溶于有機溶劑，因此緩沖鹽使用不當會導致其析出，堵塞填料基質上的微孔和顆粒的空隙，使填料辦結，柱壓上升；同時阻礙了機制上健合的碳鏈自由舒展，使色譜柱的保留能力下降，柱效降低。正確使用緩沖鹽的目的是防止緩沖鹽析出，因此正確使用緩沖鹽可歸結為一句話：使用前要過濾，使用后要沖洗。
文章鏈接：儀器設備網 https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-4000.html