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  • 發布時間:2019-04-17 16:12 原文鏈接: 真菌檢驗技術的進步

    真菌檢驗的臨床重要性日益增加。傳統的真菌培養和鑒定技術需時較長,且真菌感染的病原菌常不易培養成功,成為實驗診斷的難點。近年來,真菌感染的快速實驗診斷技術正在努力解決這一問題。一、應用分子生物學技術自臨床標本中檢出真菌DNA;二、應用單抗和免疫學技術自臨床標本中快速檢出真菌抗原;三、利用真菌的特異性酶快速診斷真菌;四、常規培養與鑒定技術的進步,現分述如下。

    一、常規分離、鑒定技術的進步利用酵母樣真菌在生長過程中形成的酶,作用于培養基中的色原底物,使菌落呈現不同的顏色,此種CHROMOAGAR的應用,利于快速分離與初步鑒定酵母樣真菌。酵母菌的常用鑒定系統已有以AP120C為代表的手工法,以ATB32C為代表的半自動法,以AMS為代表的自動代法借助于AMS的YBC卡的生化反應,應用人工雙歧層次分析鑒定法可使鑒定正確率提高。利用酵母菌生長過程中形成的予成酶作用于合成的色原底物而制成的成套微量鑒定系統RapIDYeastplusSystem,可于4小時完成酵母菌的快速鑒定,與應用API20C的一致率達97.3%。平滑念株菌可利用其快速分解菌藻糖而迅速鑒定。用4%菌藻糖的0.1mol/L枸櫞酸緩沖液,取待鑒定菌落濃涂入液中,37℃溫育3h,以尿葡萄糖試紙檢測,如在2分鐘內顯色即為平滑念珠菌。經與傳統鑒定方法比較,此法的敏感性98.8%,特異性99.1%。都柏林念珠菌的臨床重要性在增長,其簡易可靠的鑒定試驗為該菌在42℃不能生長,且-D葡萄苷酶為陰性。

    二、自臨床標本中直接檢查抗原深部真菌感染者血中難于培養出菌體,尤其是絲狀真菌菌體常粘附、纏繞于組織,血中不易出現。但組織中菌體可溶性抗原可吸收入血自血、尿或感染組織液中直接檢查真菌抗原為快速診斷的重要手段;雖也可檢查抗體,但難達快速診斷。、檢測念球菌屬的甘露聚糖及其抗原1.膠乳凝集試驗

    取300l血清,加100lEDTA處理液,混勻,煮沸3min,離心10000g10min,取上清40l加10lSanofi膠乳粒子,3min內出現凝集為陽性。

     

     

    2.EIA法。以單抗包被酶標板,用雙抗體夾心法檢查血清中念球菌抗原

    3.檢測血中的白色念球菌的甘露聚糖抗體。ENA法檢查中甘露聚糖對念珠菌感染的診斷敏感性40%,特異性98%,ENA法檢查甘露聚糖抗體對念珠菌感染的診斷敏感性53%,特異性94%。

    4.檢查血清中D-阿拉醇或D-阿拉伯醇與L-阿拉伯醇的比值可快速診斷念珠菌病。Yeo等用基因重組的D-阿拉伯醇脫氫酶以酶熒光法定量,發現念珠菌感染者血清中菌體的D-阿拉伯醇明顯升高,用此法迅速論斷新生兒的侵襲性念珠菌病。Mitsutake等比較了自39名深部念珠菌病患者血液中檢出抗原的四種方法。應用斑點印跡法檢查其烯醇化酶抗原的陽性率71.8%,特異性100%;應用膠乳凝集檢查熱敏性糖蛋白抗原陽性率76.9%,特異性87.5%;應用膠乳凝集檢查甘聚糖抗原陽性率75.6%,特異性100%,應用鱟試試驗檢查細胞壁組分-Glucan的陽性率84.4%,特異性87.5%。

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