前言
制備高質量的病理切片需要一定的技巧和經驗—但我們都須從頭開始學習。
該教程的目的是協助初學者熟悉石蠟切片的制備，以及作為經驗更豐富的技術專家的進修課程。涵蓋輪轉式切片機制備石蠟切片的設置和操作相關的基本內容。同時對切片過程中的部分常見故障進行具體說明，并提供故障排除建議。
13學習厚薄一致、高質量、薄切片的切片技術
不存在任何替代性經驗,但有一些基本步驟可使此項任務更為簡單。
采用未用過的刀片部分進行粗修。
當使用粗進刀時,避免意外切割較厚的切片,因為這可能損壞刀片或蠟塊表面。
如果蠟塊表面溫度升高或者需要更深層次的冷卻,則可能需要對蠟塊進行再冷卻。
通常情況下,緩慢、均勻的切割沖程可得到最好的結果和最小的壓縮。
在切割沖程期間切勿停止并重啟,因為這將導致同一張切片的厚度不均。
一些實驗室的常見做法是在切割每張切片之前立即對冷凍蠟塊的表面輕輕吹氣。采用溫暖潮濕的氣息會使切片的粘性增強,但該方法同樣可導致熱膨脹,從而使切片厚度增加。
蠟塊上部或下部邊緣或刀片背面存在的碎片可導致難以獲得具有粘性的條帶,從而導致條帶在上行沖程過程中與刀片之間存在提離距離。如果存在碎片,請立即清除,并重新冷卻蠟塊,然后重新開始切片。
該條帶釆用緩慢而穩定的沖程對經過良好處理且徹底冷卻的蠟塊進行切割而得。即使在浮選之前,該切片亦顯示出較小的壓縮。
14正確選擇載玻片和膠粘劑
隨后要釆用的染色方法將影響載玻片和膠粘劑的選擇。
載玻片必須無油脂和灰塵,并正確地進行存儲和處理。
如果染色包括抗原修復(IHC)、酶預處理(ISH)或長時間孵化步驟,必須使用帶電荷的載玻片或使用膠黏劑,如胺基烷基硅烷(AAS)。 一些特殊染色,特別是使用堿性染色劑時,也可能會導致切片浮起。
15 仔細漂片
漂片應該將切片展開至其原始尺寸,并確保其完全平坦。
小心監控溫度,溫度需要低于蠟的熔點(5-9℃)。
確保水源干凈,且不存在氣泡和切片浪費(避免交叉污染)。
將切片的光滑(光澤)面向下放置。
溫和的表面張力作用將切片置于水面。
當刷子或鉗子撞出波紋或氣泡時,切片很容易損壞。
對每個切片進行檢查,因為當其漂浮在水面上時,很容易觀察到其表面所存在的缺陷。
使切片離開水面,且持續足夠長的時間,從而壓平切片。過度擴張可能破壞敏感部分的形態。
為促進有效引流并防止切片在載玻片上滑動,從水中移出載玻片時應保持垂直方向。
將載玻片置入切片干燥器或烤箱之前,請將切片短暫地垂直放置以去除多余的水分。
在各蠟塊之間,采用無棉纖維織物對水面進行脫脂,以避免交叉污染的可能性。
為避免出現混合浮選,一次浮選僅針對同一蠟塊的切片。
源自兩個蠟塊的切片絕對不能同時進行漂片。因為不同類型樣本,有可能出現交叉污染和混淆,從而導致診斷不準確。因此,在任何時候均應避免該情況。
16充分干燥載玻片
正確干燥可確保切片完全脫水且不會導致熱損傷,平整且不太可能在染色過程中翹起。
在干燥之前,通過將切片垂直排出多余的水分。如果載玻片在熱平板上進行干燥,該操作將非常重要。
載玻片可以垂直放置于架子上,然后在烤箱中進行干燥。
通常情況下,干燥溫度不應超過65°C。
過熱會導致切片下方的水滴沸騰,從而導致損壞。
切片干燥應持續10到30分鐘。
對于一些脆弱的標本,在37°C條件下進行較長時間(幾小時到一整夜)的干燥可能會得到更好的結果。