1、蛋白與膜的結合原理
蛋白與膜的結合原理, 已知的結合力包括疏水作用力\H鍵\靜電作用力等,確切的結合原理并不明確,主要靠假說來支撐.主要有兩種假說:
1）首先兩者靠靜電作用力結合, 然后靠H鍵和疏水作用來維持長時間結合.
2）首先兩者靠疏水作用結合, 然后靠靜電作用來維持長時間結合.
兩條假說, 都表明其結合過程分為兩步, 首先結合和后面長時間結合.由于結合原理的不明確性, 導致在這方面的工作非常依賴實踐經驗.
2、膜對結合的影響
膜孔徑
有些技術人員傾向使用膜孔徑來區分不同的膜,但是請注意這只僅僅限于同一廠家的產品,如果是不同廠家的產品,這種比較是無意義的. 膜孔徑與層析速度的關系,已在上文描述.
隨著膜孔徑減小,膜的實際可用表面積遞增,膜結合蛋白的量也遞增. 估量表面積的參數為表面積比率(實際可用表面積與所用膜平面積的比率).
另外, 膜孔徑越小,層析速度也越小,那么金標復合物通過T線的時間也就越長,反應也就越充分.
綜合以上兩點,結論為膜孔徑越小靈敏度越高.但是同時也減慢了跑板速度,增加了非特異性結合的機會,也就是假陽性越高.所以要按照試驗結果挑選適合實際項目的膜,找到合適的平衡點.