BCIP／T是堿性磷酸酶最常使用的呈色底物，堿性磷酸酶標記的試劑應該用真核生物的堿性磷酸酶，因為這種酶容易被EDTA滅活。細菌酶難以終止其活性，易引起顯色過度，導致較高背景。
BCIP／T底物在酶結合位點形成強烈的黑紫色沉淀，此反應是一個穩定進行的過程。因此，可設定一個精確的反應對照。可以通過孵育時間的長短控制反應的敏感性。
1．需要的溶液和特殊設備
堿性磷酸酶緩沖液：100retool／L NaCl，5mmol／L MgCl2，100mmol／L Tris(pH9．5)；
T溶液(0．5gT用10ml 70％DMF溶解，貯存在4C)；
BCIP溶液(0．5gBCIP[二鈉鹽]用10m1100％DMF溶解，貯存在413)；
20mmol／LEDTA用溶解，DPX。
光學顯微鏡(通常帶有照相機以便于記錄結果)
2．操作步驟
(1)細胞染色前，準備3種貯存液：①T：用10ml 70％DMF溶解0．5gT；②BCIP：用10ml 100％DMF溶解0．5g
BCIP[二鈉鹽兒③堿性磷酸酶緩沖液：100mmol／LNaCl，5mmol／LMgCl2，100mmol／LTris(pH
9．5)。所有的貯存液置4C可保存1年。
(2)實驗前，底物液新鮮配制。加66／ul T貯存液至10ml堿性磷酸酶緩沖液中，充分混合，加33ul BCIP貯存液，在1h內使用。
(3)將洗滌過的標本片放在一個適當的容器內。加足夠量的底物液覆蓋標本片(3～5ml適合于100mm平皿)。在室溫中進行反應直到染色達到適當黑色。對一些試劑可在顯微鏡下定期監測。一般孵育時間大約是30min。
(4)在含有20mmol／LEDTA的中漂洗以終止反應，螯合Mg2+。
(5)優化：如果需要，進行復染。
(6)用水沖洗，DPX封片。