常規樣本的核酸提取
想必已不再是實驗黨們頭疼的對象了吧
然鵝，糞便基因組DNA提取步驟實在繁瑣
還可能遇到提取濃度低，純度差等問題
簡直天崩地裂啊
沒關系，這點小事MP幫你解決!
拿好這份指南
讓你的糞便DNA提取實驗事半功倍
【 一圖了解提取步驟 】
【 PART 01-預洗 】
預洗是雜質去除的關鍵步驟，由于糞便樣本中可能含有多種可溶性雜質，如膽紅素、膽汁鹽、腐殖酸、植物源性多糖等。對于成分復雜的糞便樣本，倘若不進行預洗，這些雜質會在細胞及菌體裂解后，混合在釋放的核酸中，并與核酸競爭性結合磁珠，雜質與磁珠結合后，在洗脫時與磁珠分離，導致洗脫的DNA有顏色，純度低。
預洗操作
1.向Lysing Matrix E管中加入樣本，再加入1mL Pre-wash Buffer，用渦旋震蕩儀渦旋至糞便樣本被完全重懸起來。
2.因糞便狀態而異，渦旋時間控制在1min以內，時間過長會導致一部分細胞或菌體破裂，損失一部分DNA。
3.12000rpm，離心5min，棄去上清，保留沉淀。
除了按照預洗操作執行以外，對于各類型的樣本也會有不同注意事項：
【 PART 02-裂解與去雜 】
裂解：樣本預洗后，向Lysing Matrix E中依次加入裂解液的三種成分：Lysis Buffer F1、Lysis Buffer F2、RNase A，渦旋混勻。
使用FastPrep-24TM 5G研磨儀，5 m/s，研磨40s或用渦旋震蕩儀以最大速度渦旋10 min，離心后保留上清液，棄去沉淀。
去雜質：將上清液轉移到新的離心管中，添加去雜劑：PPS，主要用于去除蛋白等雜質。在4℃放置5 min能提高效果，離心后，保留上清液，棄去沉淀。
【 PART 03-結合-漂洗-洗脫 】
圖 |磁珠法提取
這三個步驟可以手工操作，也可以配合自動化核酸提取儀實現自動化批量操作。一般來說，手工提取預計在40-45 min左右完成，采用MP公司的24孔磁力架（貨號 116570413），可以一次處理24個樣本。而采用自動化儀器提取，隨著樣本數量的增加，操作時間并不延長，樣品處理量成倍增加，效率大大提高，從此解放雙手。
圖 |24孔磁力架
手工操作
自動化操作
1. 將400 μL上清液轉移至 96 孔板從左至右的第二列中，并按照下表在各添加其他試劑。 
2. 按照下表設置程序，運行自動化核酸提取儀。