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  • 發布時間:2020-08-17 17:36 原文鏈接: 磷酸酶a的測定

    實驗方法原理 4-α-D-葡聚糖:正磷酸-α-D-葡萄糖基轉移酶。


    酶斷裂多糖的α-1,4-糖苷鍵:

    (葡萄糖)n+Pi →(葡萄糖)n-1+葡萄糖-1-P


    實驗中反應與葡萄糖磷酸變位酶偶聯:

    葡萄糖-1-P → 葡萄糖-6-P


    并且 6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化:

    葡萄糖-6-P+NADP+ → 葡萄糖酸-6-P+NADPH+H+

    實驗材料 磷酸酶 a

    試劑、試劑盒 磷酸鉀EDTA糖原葡萄糖磷酸變位酶 6-磷酸葡萄糖脫氫酶

    儀器、耗材 分光光度計

    實驗步驟

    實驗所需「試劑」具體見「其他」


    0.98 ml 實驗混合物



    0.02 ml 酶樣品


    25 ℃ 時,于 340 nm 處吸收值降低,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。


    注意事項

    其他

    試劑:


    0.05 mol/L 磷酸鉀,pH 6.8


    0.01 mol/L EDTA(Mr=292.3,29.2 mg 溶于 10 ml 水中)


    糖原(60 mg 溶于 10 ml 水中)


    1 mmol/L 1,6-二磷酸葡萄糖(脂鯉環己基銨鹽,Mr=736.8;7.4 mg 溶于 10 ml 水中)


    0.01 mol/L NADP(Mr=787.4;79 mg 溶于 10 ml 水中)


    1 mol/L MgCl2(Mr=203.3,六水合物,2 g 溶于 10 ml 水中)


    葡萄糖磷酸變位酶 100 U/mg(100 U/ml 溶液)


    6-磷酸葡萄糖脫氫酶,200~400 U/mg(300 U/ml 溶液)。兩種酶在使用之前,都要用游離的銨鹽制備。如果外加了硫酸銨懸浮液,在用前必須用 0.05 mol/L 磷酸鉀 pH 6.8 透析。


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