1.小鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉麻醉后，用立體定位儀固定頭部。
2.頭頂部皮膚常規消毒，正中矢狀切開頭皮，依照小鼠圖譜坐標定位，顱骨鉆孔，在紋狀體部位用微盤進樣器徐緩注人0.5μL10%BDA溶液（溶于生理鹽水），5min內注射完畢，留針lOmin后緩慢退出。
3.動物存活7d后進行灌注固定，取出腦組織。
4.25%蔗糖脫水后，進行連續冠狀冰凍切片，片厚14μm,切片貼于包被明膠的載玻片上。
5將含黑質部位的切片分別入0.1MPBS中漂洗后，入含有辣根過氧化物酶－鏈霉卵白素復合物(0.1M PBS 1:500稀釋）中，孵育2h后進行DAB顯色。
6.脫水、透明，DPX封片。第5步也可以進行加入抗生物素的熒光二抗進行孵育，然后封片，用熒光顯微鏡觀察。BDA可用于順行和逆行追蹤，但順行追蹤的效果更好一些，可以很清楚地觀察到在中腦黑質部位棕色的DAB顯色陽性纖維和綠色熒光陽性纖維，可見，由BDA追蹤的神經纖維末梢形態比較清楚，可以觀察到由紋狀體向黑質的投射情況。 展開 | 