原理蛋白質與福林(Folin)-酚試劑反應，產生藍色復合物。作用機理主要是蛋白質中的肽鍵與堿性銅鹽產生雙縮脲反應，同時也由于蛋白質中存在的酪氨酸與色氨酸同磷鉬酸-磷鎢酸試劑反應產生顏色。呈色強度與蛋白質含量成正比，是檢測可溶性蛋白質含量最靈敏的經典方法之一。
此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即Folin—酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質的靈敏度。這個方法的優點是靈敏度高，比雙縮脲法靈敏得多，缺點是費時較長，要嚴格控制操作時間，標準曲線也不是嚴格的直線形式，且專一性較差，干擾物質較多。
福林酚比色法注意事項
(1) Folin-酚乙試劑在酸性條件下較穩定，而Folin－酚甲試劑是在堿性條件下與蛋白質作用生成堿性的銅－蛋白質溶液。當Folin－酚乙試劑加入后，應迅速搖勻（加一管搖一管），使還原反應產生在磷鉬酸－磷鎢酸試劑被破壞之前。
(2) 血清稀釋的倍數應使蛋白質含量在標準曲線范圍之內，若超過此范圍則需將血清酌情稀釋。