離子交換層析實驗可應用于：（1）分離純化蛋白質；（2）分離氨基酸；（3）分離核酸、核苷酸及其它帶電荷的生物分子。
| 實驗方法原理 | 離子交換層析（Ion Exchange Chromatography簡稱為IEC）是以離子交換劑為固定相，依據流動相中的組分離子與交換劑上的平衡離子進行可逆交換時的結合力大小的差別而進行分離的一種層析方法。 |
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| 實驗材料 | 離子混合物樣本 |
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| 試劑、試劑盒 | 離子交換緩沖液 |
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| 儀器、耗材 | 離子交換層析柱梯度混合器電導表 |
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| 實驗步驟 | 1. 配制離子交換層析緩沖液，安裝好層析柱，但以離子交換層析緩沖液取代其中的凝膠過濾緩沖液。
2. 用起始梯度的緩沖液溶解含蛋白質混合物的樣品。
3. 棄去柱床上部的大部分緩沖液，并將樣品加在凝膠的頂上。只要樣品的離子強度不超過起始緩沖液的離子強度，上樣體積不限。
4. 讓樣品流入凝膠柱床，并用緩沖液沖冼層析柱的內壁，用吸管往凝膠的頊上 加一層1 cm 高的緩沖液。 5. 連接梯度混合器，分部收集100個級分，每個組份相當于約1%總禪度體積。測各組分的A280以確定蛋白峰的所在，用電導表測離子強度以確定禪度的形狀。 展開 |
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| 注意事項 | 1.洗脫液體積應足夠大，一般要幾十倍于床體積，從而使分離的各峰不至于太擁擠。
2.梯度的上限要足夠高，使緊密吸附的物質能被洗脫下來。
3.梯度不要上升太快，要恰好使移動的區帶在快到柱末端時達到解吸狀態。目的物的過早解吸，會引起區帶擴散；而目的物的過晚解吸會使峰形過寬。 展開 |
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| 其他 | 1.離子交換劑的再生與保存離子交換劑可在柱上再生。如離子交換纖維素可用2mol/：NaCl淋洗柱，若有強吸附物則可用0.1mol/LNaOH洗柱；若有脂溶性物質則可用非離子型去污劑洗柱后再生，也可用乙醇洗滌，其順序為：0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存離子交換劑時要加防腐劑。對陰離子交換劑宜用0.002%氯已定（洗必泰），陽離子交換劑可用乙基硫柳汞（0.005%）。有些產品建議用0.02%疊氮鈉。
2.進一步全面了解離子交換層析請查閱：https://research.fhcrc.org/content/dam/stripe/hahn/methods/biochem/Ion_Exchange_Chromatography_Handbook.pdf 展開 |
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