離子交換層析實驗

離子混合物樣本

離子交換緩沖液

離子交換層析柱 梯度混合器 電導表

1.  配制離子交換層析緩沖液，安裝好層析柱，但以離子交換層析緩沖液取代其中的凝膠過濾緩沖液。

2.  用起始梯度的緩沖液溶解含蛋白質混合物的樣品。

3.  棄去柱床上部的大部分緩沖液，并將樣品加在凝膠的頂上。只要樣品的離子強度不超過起始緩沖液的離子強度，上樣體積不限。

4.  讓樣品流入凝膠柱床，并用緩沖液沖冼層析柱的內壁，用吸管往凝膠的頊上 加一層1 cm 高的緩沖液。

5.  連接梯度混合器，分部收集100個級分，每個組份相當于約1%總禪度體積。測各組分的A280以確定蛋白峰的所在，用電導表測離子強度以確定禪度的形狀。

1.洗脫液體積應足夠大，一般要幾十倍于床體積，從而使分離的各峰不至于太擁擠。

2.梯度的上限要足夠高，使緊密吸附的物質能被洗脫下來。

3.梯度不要上升太快，要恰好使移動的區帶在快到柱末端時達到解吸狀態。目的物的過早解吸，會引起區帶擴散；而目的物的過晚解吸會使峰形過寬。

1.離子交換劑的再生與保存離子交換劑可在柱上再生。如離子交換纖維素可用2mol/：NaCl淋洗柱，若有強吸附物則可用0.1mol/LNaOH洗柱；若有脂溶性物質則可用非離子型去污劑洗柱后再生，也可用乙醇洗滌，其順序為：0.5mol/LNaOH-水-乙醇-水-20%NaOH-水。保存離子交換劑時要加防腐劑。對陰離子交換劑宜用0.002%氯已定（洗必泰），陽離子交換劑可用乙基硫柳汞（0.005%）。有些產品建議用0.02%疊氮鈉。