離子交換色譜中對流動相的要求
離子交換色譜展開劑的選擇要依據被分離化合物的酸堿性,可用各種類型的緩沖液或鹽溶液作為展開劑。選擇展開劑的前提是根據被分離化合物是酸還是堿,是陰離子還是陽離子來選擇。為了使這些離子型化合物得到較好的分離,點樣前必須用水或0.1mol/L氯化鈉溶液對薄層板展開一次,即可使離子交換薄層得到再生或活化。
由于水是優良的溶劑并具有電離性,因此大多數用離子交換樹脂進行色譜分離時,都是在水溶液中進行的。有時亦采用水/甲醇混合溶劑,因為在水相展開劑中加入少量能與水混溶的有機溶劑可以增加樣品組分的溶解度并且改變溶劑的分離選擇性,還可以減少某些組分的拖尾現象。緩沖液用來控制展開劑的pH值,如在陽離子交換樹脂中,經常采用醋酸、枸櫞酸、磷酸緩沖液;在陰離子交換樹脂中,則采用氨水、吡啶等緩沖液。另外也可通過加入某些鹽類溶液來調節展開劑的離子濃度。
常用的離子交換色譜展開劑有四種類型:
①pH=3.0~8.0的各種離子強度的緩沖溶液,如pH8.0的0.005mol/L磷酸緩沖液或pH3.4的2mol/L氯化鉀或氯化鈉溶液;
②鹽溶液,如0.1~2.0mol/L氯化鉀或氯化鈉溶液;
③蒸餾水;
④在上述各種展開劑中加入少量有機溶劑如甲醇、四氫呋喃、乙腈等。