離心條件的選擇:
速度:顆粒小用較高速度,顆粒大則用較低速度。有的物體如細胞,有囊膜的病毒,轉速太高會變形或失活,要較低轉速和較長時間。
溫度:溫度低些樣品不易失活。但并非越低越好。溫度太低鹽易析出或結晶,無法離心。溫度太低蔗糖溶液粘度迅速增加,形成很大的阻力。使沉降過程變得很難進行離心管也會發脆,樣品也容易成團,影響區帶的形成。常用的離心溫度是10-15℃。
(1) 直接吸取
用長針頭注射器直接吸取所需的區帶.該法適用于只有一、二條帶的情況。當形成的帶子很多,或者帶子很弱,或要對整個梯度進行分析時不適用。
(2) 頂替法
把很稠很重的介質(如60%-70%)的蔗糖液慢慢注入離心管底部,將離心管中的溶液頂替出來。
(3) 穿刺法
先用一塊膠布貼在離心管底部,再用針頭刺穿離心管的底部,使液體順針頭逐滴流出,再分部收集。
(4) 虹吸法
用一根很細的管插到離心管的底部,將溶液導出分段接收,要注意防止已分開的區帶被擾亂。
A. 通過一針管將密的液體泵到梯度的底部,然后將一專門的蓋帽導出。
B. 可穿刺離心管底,使梯度滴出,將一具有合適閥門的蓋帽放到離心管頂可控制替換的速度。
C. 可在離心管頂裝一蓋帽,泵入空氣或輕的液體,通過插到離心管底部的針管將梯度替換出。
離心后轉頭和離心管的處理:離心結束后,離心管可用有機碘,新潔爾滅,過氧乙酸等消毒,有些管可以高壓滅菌(如PP,PC,PF見前節介紹離心管特性)。
轉頭可用清水洗凈,禁止用熱水(會退火,影響強度),腐蝕劑和硬刷子(破壞保護層,失去平衡精度)。盡快擦干放好,嚴禁碰撞。