等溫擴增到底行不行？

最近又看到一些同行寫的關于等溫擴增的文章。不禁想起幾年前看到的RPA技術介紹。

當時第一次看到這個技術的時候，簡直可以用“震驚”、“驚艷”來形容。擴增速度真快啊，十幾分鐘就能出結果，比現在吭哧吭哧做PCR豈不是方便多了！可是幾年過去了，似乎也沒看到基于RPA技術的臨床產品上市。說真的是有點失望的。就像對一部大導演拍的電影滿懷期待，看完了發現其實不咋地是一樣的心情。

一、TwistDx公司的RPA技術

重組酶聚合酶擴增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA）具體原理不再介紹。2006年發明，到目前為止開發了一系列產品，都用在科研上。發表的論文也有一些，病原體檢測、動植物檢測都有。

網上搜索了一番，發現整個2019年都沒什么新聞，TwistDx官網的News板塊還停留在2018年四月。公司被雅培收購以后，沒什么動靜。

按理說這么優秀的技術，這么多年過去了，不應該沒出臨床產品。什么原因？成本高？（真正好的技術成本高點也無妨）ZL？（不愿意授權給別的廠家共同開發產品？）技術本身準確性不如新聞說得那么好？雅培根本不重視這個方向？不得而知。

二、等溫擴增的技術難點

筆者曾經接觸過LAMP等溫擴增一段時間。LAMP引物難設計，非特異擴增（假陽性）難消除；對實驗條件要求不高，恰恰造成了容易污染實驗環境；擴增時間跟樣本濃度有關，低濃度樣本擴增時間很長，跟熒光PCR相比時間上差不多。最終因為非特異擴增問題項目不了了之。

三、國產等溫擴增產品

目前國內等溫擴增科研產品不少，獲得注冊證的產品并不多。

1. 等溫擴增微流控芯片

北京某公司產品，LAMP方法，一次檢測多種病原體。曾遇到某醫生對這個儀器贊不絕口，使用方便，靈敏度較高。

2. RNA恒溫擴增

上海某公司產品。據醫生介紹（兩年前），靈敏度不如熒光PCR法，結果不是很穩定。相信這兩年產品性能已經有了改進。

3. 恒溫擴增-層析法

武漢某公司產品。做成了POCT產品，操作簡便。如果能家用就更好了，感冒了在家里測一下，也省得去醫院。但不知是如何規避污染問題的，卡盒如果沒有密封措施，容易造成氣溶膠污染。 

四、小結

現在臨床上熒光PCR使用廣泛，既有大型的自動化工作站，也有小型的POCT產品。單純靠等溫擴增作為亮點并沒有那么容易進入醫院。不管是等溫擴增還是熒光PCR，一個好產品最重要的還是結果準確、操作簡便。有的技術號稱擴增只需十幾分鐘，結果需要手工提取核酸花上一個小時，一樣不實用。