1. 將稀釋液加至滅菌平皿內時，應根據食品衛生標準要求或對標本污染情況的估計，選擇2～3個適宜稀釋度，分別在作10倍遞增稀釋的同時，即以吸取該稀釋度的吸管移lmL稀釋液加入皿內(從皿側加入，不要揭去皿蓋)，最后將吸管直立使液體流畢，并在皿底干燥處再擦一下吸管尖將余液排出，而不要吹出。每個稀釋度應作2個平皿。
2. 用于傾注平皿的營養瓊脂應預先加熱使融化，并保溫于45±1℃恒溫水浴中待用。傾注平皿時，每皿內傾入約15mL，最后將瓊脂底部帶有沉淀的部分棄去。
3. 為了防止細菌增殖及產生片狀菌落，在檢液加入平皿后，應在20分鐘內向皿內傾入瓊脂，并立即使其與瓊脂混和均勻。
4. 檢樣與瓊脂混和時，可將皿底在平面上先向一個方向旋轉，然后再向相反的方向旋轉，以使充分混勻。旋轉中應加小心，不要使混和物濺到皿邊的上方。為了保證混和均勻，而不濺及皿邊的上方，可使用江蘇省無錫縣衛生防疫站童鶴泉設計制成的自動平皿旋轉儀，直接將加有檢樣的平皿放在旋轉儀上(可同時放4只平皿)，加入瓊脂后，開動電鈕，在數十秒鐘內即可自動左右旋轉而使皿內的檢樣與瓊脂混合均勻。
5. 皿內瓊脂凝固后，不要長久放置，然后始翻轉培養，而應于瓊脂凝固后，在數分鐘內即應將平皿翻轉予以培養，這樣可避免菌落蔓延生長。必要時，可先將皿打開倒置(皿底向上)于溫箱內經15~60分鐘使瓊脂表面干燥后，再將皿底移至蓋內倒置于溫箱內培養。這樣可以阻止運動性強的變形桿菌屬、假單胞菌屬和芽胞桿菌屬中一些菌株在瓊脂表面擴展生長。
6. 為了控制污染，在取樣進行檢驗的同時，于工作臺上打開一塊瓊脂平板，其暴露的時間，應與該檢樣從制備、稀釋到加入平皿時所暴露的最長的時間相當，然后與加有檢樣的平皿一并置于溫箱內培養，以了解檢樣在檢驗操作過程中有l無受到來自空氣的污染。
7. 培養溫度：
應根據食品種類而定。肉、乳、蛋類食品用37℃培養，水產品用30℃培養。培養時間為48±2小時。其他食品，如，清涼飲料，調味品，糖果、糕點．果脯，酒類(主要為發酵酒)、豆制品和醬腌萊均系用37℃24±2小時培養。培養溫度和時間之所以有這種不同的區分，乃是因為在制定這些食品衛生標準中關于菌落總數的規定時，分別采用了不同的溫度和培養時間所取得的數據之故。水產品因來自淡水或海水，水底溫度較低，因而制定水產品細菌方面的衛生標準時，系用30℃作為培養的溫度。