簡單概述真皮成纖維細胞的制備培養步驟

　真皮成纖維細胞屬于由中胚層分化而來的間質細胞。細胞來源于皮膚組織，是一種貼壁培養方式的細胞，由于這些細胞非常容易培養，它們已經被廣泛用于細胞和分子生物學研究中。

　　成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化。成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。

　　一般而言，成纖維細胞能夠分泌I型和III型膠原等細胞外基質，并且研究表明不同器官中的成纖維細胞有顯著的不同。傷口修復時，真皮成纖維細胞由可增殖，可遷移的表型變為有收縮性的，可重塑基質的表型，同時，它們會分泌大量的透明質酸來應對修復時的炎癥反應。

　　真皮成纖維細胞的制備方式：

　　1、首先在分離的細胞時要做到在無菌條件下進行，打開生物安全柜紫外燈進行30min作無菌處理。

　　2、將手術廢棄的皮膚組織浸泡75%酒精，消毒2min。

　　3、將皮膚組織置含P/S的PBS中清洗至少3遍，然后用眼科剪除去脂肪及結締組織等。

　　4、將皮膚剪成0.5*0.5cm小塊，放入dish中，加0.1%的dispase溶液，封口膜封口，4℃冰箱過夜消化。

　　5、24小時后用鑷子將表皮與真皮分開（薄的那層是表皮，厚的那層是真皮），

　　6、將真皮剪碎，移至離心管，用0.1%膠原Ⅰ型酶+0.1%膠原Ⅱ型酶+0.1%膠原Ⅳ型酶+37℃水浴鍋中消化至少2h（視消化程度而定）。

　　7、用100μm網篩過濾，取濾液，300g，離心5min，用完全培養基重懸沉淀（每隔一天都必須換液）。

　　以上是真皮成纖維細胞分離培養的一種方式，不同的技術人員分離培養的方法也不同，使用的試劑比例也不盡相同。細胞純度可高達于90%，所有的細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。