取本品，加溶劑【四氫呋喃-甲醇-水(10：42：48)】溶解并定量稀釋制成每1mL中含0.5mg的溶液，作為供試品溶液；精密量取適量，加溶劑定量稀釋制成每1mL中含0.5μg的溶液，作為對照溶液。照高效液相色譜法（附錄V D）試驗，用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸銨溶液（取磷酸銨6.6g，加水950mL使溶解，用0.5mol/L磷酸溶液或1 mol/L氫氧化鈉溶液調節pH值至8.0，加水至1000mL）-甲醇-四氫呋喃（48 : 42 : 10）為流動相，檢測波長為254nm。取2-氨基-2'-氯-5-硝基二苯酮對照品（雜質I）適量，加供試品溶液溶解并制成每1mL中含0.5μg的溶液，作為系統適用性試驗溶液。取系統適用性試驗溶液20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，氯硝西泮峰與雜質I峰的分離度應大于8.0。取對照溶液注入液相色譜儀，調節檢測靈敏度，使主成分峰的峰高約為滿量程的20%；精密量取對照溶液和供試品溶液各20μL，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主成分峰保留時間的3倍。供試品溶液的色譜圖中如有與雜質I峰保留時間一致的色譜峰，其峰面積不得大于對照溶液的主峰面積（0.1%），其他單個雜質峰面積不得大于對照溶液主峰面積的2倍（0.2%），各雜質峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的5倍（0.5%)。