血液生化檢查：佝僂病、骨軟化病活動期血鈣可正常或偏低[正常2.2～2.7mmol/L（9～11mg/dl)]；血磷降低[成人正常0.9～1.3mmol/L（2.8～4mg/dl）、兒童正常1.3～1.9mmol/L（4～6mg/dl)]，鈣磷乘積<30（正常40）。 [3]
血堿性磷酸酶增高（正常15～30金氏單位），此法是診斷佝僂病常用的指標，但缺乏特異性，且受肝臟疾病影響較大。近年來提倡骨堿性磷酸酶測定，正常參考值為≤200μg/L。血清中堿性磷酸酶以骨堿性磷酸酶為主，為成骨細胞所分泌，當維生素D缺乏時該細胞活躍，血清中骨堿性磷酸酶升高，升高程度與佝僂病嚴重程度密切相關，對佝僂病早期診斷敏感性高。血清25-(OH)D正常12～200nmol/L（5～80ng/ml）；血清1，25-(0H)2D正常40～160pmol/L（16～65pg/ml），由于25-(OH)D的濃度比1，25-(OH)2D高三個等級，即使25-(OH)D處于低水平的維生素D缺乏病人也有足夠的25(OH)D-1羥化酶的基質。因此血清1，25-(OH)2D濃度對評價維生素D缺乏幾乎沒有價值。恢復期血液生化檢查均恢復至正常。