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  • 發布時間:2019-03-26 14:56 原文鏈接: 粘粒和質粒克隆的純化實驗

    文庫一旦包裝就應該盡快進行擴增,它可以大大增加文庫的拷貝數,但在擴增時由于克隆的生長速率不同,文庫的組成可能會出現某種潛在的改變。這種文庫克隆組成比率的變化可以通過把文庫克隆預吸附到細菌上并使用一種高密度鋪平板和短期培養的方法而盡量減少。


    實驗材料

    質粒

    試劑、試劑盒

    LB抗生素

    儀器、耗材

    涂布棒硝酸纖維濾膜

    實驗步驟

    1.  通過原位雜交檢測硝酸纖維索濾膜上影印菌落。

    2.  用無菌的牙簽挑出陽性克隆,接種到含適當抗生素的1 ml 冷的LB培養基中,保存在4℃抑制細菌生長。

    3.  取1~25 μl 菌懸液涂布在含有相同抗生素的平板上,37℃培養過夜,在直徑100 平板上長出25~250個菌落為宜。

    4.  將菌落影印在硝酸纖維素濾膜上,變性、復性、烤膜和雜交化。

     

    5.  對照次級平板的放射自顯影結果,挑選獨立的陽性克隆,培養擴增后分離質粒或粘粒的DNA。



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