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  • 發布時間:2019-09-10 11:06 原文鏈接: 粘粒和質粒克隆的純化實驗

    • 基本方案

               

    實驗材料

    質粒

    試劑、試劑盒

    LB 抗生素

    儀器、耗材

    涂布棒 硝酸纖維濾膜

    實驗步驟

    1.  通過原位雜交檢測硝酸纖維索濾膜上影印菌落。

    2.  用無菌的牙簽挑出陽性克隆,接種到含適當抗生素的1 ml 冷的LB培養基中,保存在4℃抑制細菌生長。

    3.  取1~25 μl 菌懸液涂布在含有相同抗生素的平板上,37℃培養過夜,在直徑100 平板上長出25~250個菌落為宜。

    4.  將菌落影印在硝酸纖維素濾膜上,變性、復性、烤膜和雜交化。

     

    5.  對照次級平板的放射自顯影結果,挑選獨立的陽性克隆,培養擴增后分離質粒或粘粒的DNA。

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