明膠凝集試驗(gelatin agglutination test,GAT)
【準備】
(1)配制 Baker液(Bakersolution);
葡萄糖3.00gNa2HPO4·7H2O0.46g;
NaCl0.20gKH2PO40.01g;
加雙蒸水至100mL。
(2)用 Baker液配制10%白明膠溶液,并置37℃水浴中備用。
(3)精子懸浮液:取正常新鮮精液(精子密度為80×106/mL 左右,活動率>60% ,a、b兩級活動精子 >70% ),室溫液化,用 Baker液稀釋至40×106/mL,置37℃水浴中保存備用。
(4)待檢血清及對照血清處理,均經56℃水浴加熱30min,以滅活補體。隨后用Baker液,將兩種血清均作1∶4~1∶32倍數稀釋,存放于37℃水浴中備用。
【方法】
(1)取一定量的精子懸浮液,加入等量的10%明膠溶液,充分混合后,取0.3mL分別加入裝有0.3mL對倍稀釋血清的各支小試管內,并使其充分混合。
(2)將混合液分別用毛細吸管移置另一小試管(3mm ×30mm)內,37℃ 孵育2h,移置4℃放置5min,待明膠凝固后,觀察明膠內精子凝集情況,并判斷結果。
【判斷】
(1)陰性:精子在明膠內均勻分散,若以黑紙作背面對光觀察,呈均勻乳白色,不見凝集塊。
(2)陽性:精子成小凝集塊,對光觀察可見小凝集塊有如雪花紛飛狀,不難鑒別。
(3)抗體效價:以陽性反應的最高血清稀釋倍數為血清凝集抗體效價。