五、免疫學檢查
據 WHO估測，在育齡夫婦原因不明的不育癥中，免疫性不育占約10-20%，近年來對免疫性不育機制的研究發展很快，了解到抗精子抗體是引起免疫性不育的重要原因之一。
（一）抗精子抗體
精子的抗原性很強，不僅可引起的異種免疫和同種異體免疫，其器官特異性抗原尚可引起自身抗精子抗體的產生，精管阻塞、睪丸損傷、炎癥、附睪等副性腺感染均可使精子抗原進入血循環或淋巴系統，激活免疫系統引起免疫應答，產生身身抗精子抗體。精子出現包被抗體是免疫性不孕典型特征，精液中精子抗體幾乎全部為IGA、IGG、IGA的臨床意義可能更為重要，IGM在精液中極為罕見。ASAB與精子結合后可引起精子凝集、制動；抑制精子的項體活性，使之難以穿透包圍卵細胞的放射冠和透明帶，阻礙精了與卵細胞結合，即使完成受精過程亦可導致死胎或流產。檢測抗精子抗體的試驗有：
1．精子凝集試驗（spermagglutination test,SAT）血清、生殖道分泌物中存在的ASAB與精子膜固有抗原結合，使精子出出頭-頭、頭-尾、尾-尾的凝集現象。用試管玻璃片凝集法可或淺盤凝集法無凝集，或觀察10個高倍視野6個以上視野無凝集者表示生育力正常。
2．精子制動試驗（spermimmobilization test,SIT）ASAB與精子表面抗原相互作用激活補體系統，使精子項體破壞，膜通透性及完整受損，導致精子失去活力，正常時精子制動值<2。
3．免疫珠試驗：免疫珠是用兔抗人免疫球蛋白共價結合的聚丙烯酰胺微球，可同時檢測IGa 、IGG、IGM抗體。用洗滌后的精子懸液與免疫珠懸液混合后，免疫珠會粘附于表面有抗體的精子上，使用相關差顯微鏡觀察，大于等于20%的活動精子同免疫珠粘附時為陽性，但至少有50%活動精子被免疫珠免疫被才認為有臨床意義。
4．混合免疫球蛋白試驗（MAR試驗）用混合的未加處理的新鮮精液與包被人IGG的膠乳粒混合，再向混合液中加入特異的單克隆抗人IGG血清，在膠乳粒與活動精子之間形成混合凝集證明精子表面有IGG抗體存大。這可用為常規篩選方法。大于等于50%的活動精子同顆粒粘附表示可能為免疫性不育；10-50%活動精子與顆粒粘附，可疑為免疫性不育。
免疫珠試驗與MAR試驗兩者結果并非經常一致免疫珠試驗與血清精子凝集試驗和制動試驗呈正相并。如這些試驗為陽性，還應輔經其它試驗以加強診斷的正確性。
ASAB還可用其它現更敏感的方法檢測如免疫酶法等，不育夫婦ASAB陽性者占25%-30%，其所針對的抗原絕大多數在精子膜上。
（二）精漿免疫抑制物質
人類精液含30多種抗原，但其進入女性生殖道后通常并不引起免疫應答，這是因為在精漿中含有免疫抑制物質（seminal plasma immunoinhibition material,SPIA）。SPIM免疫抑制效應可能是多種物質綜合作用的結果，其中的妊娠相關蛋白A亦稱為男性抑制物質能抑制機體對精子的免疫反應，保護受精卵免受排斥，以難維持正常生殖生理過程，據研究，MIM活性減低與不育癥、習慣性流產、配偶對丈夫精液過敏等疾病密切相關的。一但MIM減低，對自身和配偶的ASAB形成抑制作用減弱，則抗體生成率增高；加一方面對ASAB的抗精了反應亦缺乏抑制力，故可引起上術疾病。MIM檢測對上述疾病的診斷具有重要的意義。
精漿免疫抑制物質測定常用SPIM抗補體試驗和MIM單向免疫擴散試驗。
（三）精漿免疫球蛋白測定
正常男性精漿IGA、IGG、IGM含量分別為（90.3±57.7）mg/L(28.6±16.7)mg/L (2.3±1.9)mg/L.抗精子抗體陽性者IGM增高，生殖系炎癥者分泌型IGA增高。
六、微生物學檢查
男性生殖道任何部位感染均可從精液是檢出微生物。迄今已人精液中檢出的微生物達30多種。包括細菌、支原體、病毒和原蟲等。常見的病在微生物有金黃色葡萄球菌、鏈球菌、淋病奈瑟菌、大腸埃希菌、類白喉桿菌、解脲支原體等。若炎癥部位有較多的上皮細胞脫落，還可能在細胞內查沙眼衣原體包涵體的單純皰疹病毒及巨細胞病毒包涵體等。據報道由生殖道感染所致不育癥發病率比非感染不育癥高四倍。
精液的細菌學檢查應在常規消毒的條件下，以手淫法采集精液于無菌容器內，常規涂片進行革蘭氏染色或抗酸染色檢查等，亦可于37攝氏度液化30分鐘后作細菌培養；需氧培養結果>1000CFU/ml方有臨床意義。
近年來淋病奈瑟菌引起的生殖道感染有所增加，許多實驗室開展了淋球菌快速檢查項目，如直接熒光抗體染色等，亦有應用PCR技術檢查者。直接熒光抗體染色靈敏度高，但特異性差，PCR技術需嚴防污染。
七、精子功能檢查
精子與卵結合除精子濃度和數量因素外，還必須具備妝好的運動功能和對宮頸粘液、卵細胞放射冠、透明帶及卵細胞膜的穿透力。精子穿透力是評價精子功能的主要指標之一，據報告，約18%精液常規檢查正常的精子不能穿透宮頸粘液，所以檢查精子功能對研究精子在體內運行，受精能力發及男性不育的原因有重要價值，其常用的試驗有：
1．體內穿透試驗：（in vivopenetration test）又稱性交后試驗。檢查于排卵期性交后一定時間內宮頸中粘液活精子數量，存活率及活運動力，以評價精子對宮頸粘液的穿透能力，正常人可見>50個HPF有正常活動能力的精子。當宮頸粘液異常或有抗精子抗體時，精子體內穿透能力減弱或喪失。其結果還受雌激素分泌狀況等多種因素影響。
2．體外穿透試驗（invitro,penetration test）
（1）簡化玻片試驗：將一滴宮頸粘液置載正玻片上，用蓋玻片鋪平，兩片之間的厚度用哇化的玻璃珠控制，在載玻片兩側各滴一滴精液，使懷蓋玻片邊緣接觸，借毛細作用將精液移向蓋玻片，使宮頸粘液與精液之間現一清晰接觸界面，37攝氏度卵育30分鐘。精子在接觸界面處形成一指狀突起伸入粘液，精子穿過指狀突起進入精液，然后呈扇形散開運動。本試驗的觀察指標為：①粗精了子穿透并有90%以上具有明確直線運動的活動精子時為正常結果；②精子穿透粘液，但離開粘液與沮液接觸面<500μm為較差；③精子穿透粘液，但很快失活或僅作擺動力為異常；④精子未穿透與精液的接觸界面，精子接觸界面的精液側凝集為異常結果。
本試驗常帶來有一定的主觀性，因為在平面玻璃上使精液粘液觸界面的大小和形狀完全標準化是不可能和，因為而吸能定性評價精子粘液的相互作用。
（2）精子宮頸粘液接觸（sperm-cervicalmucus contact,SCMC）試驗：本試驗的目的是檢驗精液和燥頸內是否存在損害精子運動功能的ASAB及其損害程度，精子與近排卵期的宮頸粘液等量混合，富強溫下作用30min，鏡下計數擺動的精子，求出擺動精子的出現率（%），以單獨的精液滴鏡檢作為精子活力的對照，擺動精子的出現率越高，意味著精子不能穿過宮頸粘液。說吸ASAB對精子運動功能的損害越重，見表11-1。
表11-1 ASAB對精子運動功能損害
SCMC實驗結果 擺動精子（%） 精子運動功能受損
陰性 0-25 無
弱陽性 26-50 輕微（可疑）
陽性 51-75 明顯
強陽性 76-100 嚴重
玻片試驗與SCMC試驗陽性者可用其它供者的精液或燥頸粘液分別進行交叉試驗，以利于判斷ASAB的來源是清液或燥頸粘液。
（3）無透明帶倉鼠卵-精子穿透試驗（Zone free hamstar egg sperm penetration test,ZFHESPT）簡稱精子倉鼠卵穿透試驗是一種極為嚴格的生物學試驗，技術復雜，影響因素多。若能加強質量控制，再加上其它客觀檢查如精子活力等，可作為測定功能和基礎。
其方法將精子于BWW培養液中經37攝氏度獲能，再與用胰蛋白酶外理去除透明帶的倉鼠混合繼續孵育完成受精過種程。然后以相差顯微鏡檢查，計數卵子受精率和受精指數。
受精率（%）=受精卵數/卵細胞總數×100%
由于卵細胞已去除透明帶一個卵細胞可被多個精子穿透。FI為穿透卵細胞的精子總數與卵細胞總數之比，從整體上反映精子穿透力與項體反應。FI越高說明精子受精能力越強。
FI=穿透卵細胞的精子數/卵細胞總
[參考值] 受精率≥10%
[臨床意義] 精子倉鼠卵穿透試驗可測定人精子的獲能、項體反應和對卵細胞的穿透性能，綜合反映精子的受精能力，生育力正常的男性本試驗結果正常者占82%，不育癥患者僅有2%正常，因此對不育癥的診斷有較高的應用價值，穿透力較高的精子可選作人工授精用，成功率較高。
第二節 前列腺液檢查
前列腺液（pristatic fluid）是精液的重要組成部分，約占精液的30%通過前列腺按摩術采集的前列腺液，常常混有精囊液，由按摩時觸及精囊所致前列腺液成分較復雜，含有多種無機離子和有機化合物，其中前列腺特異抗原是前列腺癌的腫瘤標記之一。用于前列腺癌的診斷前列腺酸性磷酸酶更靈敏、特異。此外，前列腺液中還含有淀樣小體，少量上皮細胞和白細胞等有形成分。
前列腺液檢查主要用于慢性前列腺炎的診斷、病原微生物檢查及療效觀察等，也可用于性病檢查。
一、標本采集
前列腺液標本應由臨床醫師進行前列腺按摩術采集。液量少時可直接滴在玻片上，量多量收集在潔凈干燥的試管內，若按摩不出前列腺液，可檢查按摩后的尿液。采集微生物培養的標本無須無菌操作，將標本收集在滅菌的容器內。
疑為前列腺結核、膿腫或腫瘤的患者禁忌前列腺按摩。一次按摩失敗或檢查結果陰性，而明確有臨床指征者，可隔3-5天后重新復查。
二、一般性狀檢查
正常成年男性經前列腺按摩一次可采集數滴至1毫升前列腺液。前列腺炎時多減少，甚至采不出。正常的前列腺液稀薄，呈淡乳白色。前列腺或精囊炎進可變粘稠、黃煞費苦心混濁、呈膿性，有時含絮狀物或粘液絲。若有出血可呈不同程度的紅色，見于精囊炎、前列腺炎、前列腺結核、結石和惡性腫瘤等；也可因按摩時用力過重所致正常前列腺液呈弱酸性，PH6.3-6.5。超過50歲時稍增高。混入精囊液較多時，PH也增高。
三、化學檢查
前列腺液的化學成分復雜，可因疾病而變化，故可將其作為鑒別診斷的參考指標。對上些顯著的變化進行動態觀察，尚可用以評價療效和判斷預后。常見前列腺疾病的前列腺液化學成分變化見表11-2。
表11-2 常見前列腺疾病前列腺液化學成分變化
Zn(mmd/L) Ld5/LD1 Tf(mg/L) C3(mg/L) C4(mg/L) IgG(mg/L) IgA(mg/L) IgM(mg/L)
參考值 5.38±0.75 0.48±0.09 133±40 33±29 44±23 300±75 120±30 70±5
前列腺炎 1.84±0.38 4.21±0.80 154±41 64±16 47±10 720±215 260±120 140±65
前列腺肥大 6.07±0.79 1.36±0.17 192±44 49±14 77±24 __ __ __
前列腺癌 3.41±1.60 5.21±0.79 466±70 204±33 116±18 __ __ __
四、顯微鏡檢查
（一）非染色標本
1．卵磷脂小體呈圓形或卵圓形、折光性強，大小不均，多大于血小板，在政黨前列腺液涂片在均勻分布，布滿視野。前列腺炎進卵磷脂小體減少，分布不均，有成簇分布現象，嚴重者卵磷脂小體可消失，
2．紅細胞正常前列腺液中偶見紅細胞，在前列腺炎、結核、結石和惡性腫瘤時可見紅細胞增多；按摩時手法過重也可見紅細胞增多。
3．白細胞正常前列腺液中WBC<10/HPF,分散存在。若WBC>10/HPF，成簇分布，是慢性前列腺炎的指征之一。
4．前列腺顆粒細胞：胞體較大含卵磷脂顆粒較多，可能是吞噬了卵磷脂顆粒的巨噬細胞，正常前列腺液中此種細胞不超芝1/HPF，前列腺炎時可增多數倍至10倍，老年人的前列腺液中也可見此種細胞增多。
5．淀粉樣小體：圓形或卵圓形，具有同心圓線紋的層狀結構，微黃煞費苦心或褐色，形似淀粉顆粒，故名淀粉樣小體，其中心常含碳酸鈣沉積物。如與膽固醇結合可形成結石。前列腺液中的淀粉樣小體隨年齡增長遞增，無臨床意義。
6．精子 因精囊受擠壓而排出，無臨床意義。
7．滴蟲 見于滴蟲性前列腺炎。
（二）染色標本
瑞特、H-E或巴氏染色的標本細胞結構清晰易辯，適合于檢查炎癥變性的細胞和癌細胞，有助于前列腺炎和惡性腫瘤的診斷及鑒別診斷。
五、微生物學檢查
用前列腺液制作涂片進行革蘭氏染色或抗酸染色。革蘭氏染色可橙出前列朱和精囊感染的病原菌。以葡萄球菌最常見的，其次是鏈球菌的革蘭氏陰性桿菌（常為大腸埃希菌），也可見到革蘭氏陰性球菌（淋病奈瑟菌的可能性最大）。前列腺液中的致病性分支桿菌只有結核分支桿菌一種。進行抗酸菌檢查有助于慢性前列腺炎與結核的鑒別診斷。
涂片檢查細菌陽性率低，且不易確定細菌種屬，也有能用藥敏感試驗，故必要時尚需做培養檢查。