目前,糖化血紅蛋白HbA1c作為糖尿病篩選、診斷、血糖控制、療效考核的有效檢測指標,在臨床中得到了廣泛的使用,其理由有二個:
目前HPLC法測定HbA1c使其準確性和重復性得到很大的提高。美國臨床化學協(AACC)糖化血紅蛋白標準化分會和IFCC HbA1C標準化工作組建議,以DCCT研究中所“指定的方法”- HPLC方法作為檢測糖化血紅蛋白的金標準,希望以此使大多數的實驗方法能夠參照“指定的方法”實現標準化。
1993年美國 1型糖尿病控制及并發癥實驗(DCCT)和英國大規模的2型糖尿病控制與并發癥關系研究(UKPDS)的研究中把HbA1c作為糖尿病控制的一個觀察指標。1996年4月起在日本,HbA1c被納入老年人保健法中糖尿病篩選的檢查項目。2002年美國糖尿病協會(ADA)已將其作為監測糖尿病控制的金標準,對其應用也作了明確的規定:即所有糖尿病患者均應常規測定HbA1c。其初診時測定結果為基線時的代謝狀況,此后的測定值則作為糖尿病長期治療控制中的一部分,這樣在提高糖尿病診斷水平、血糖控制、慢性并發癥的防治中具有十分重要的應用價值。
目前通常認為檢測HbA1c的臨床意義有三點:
在糖尿病的篩選普查中有早期提示的價值,可作為輕癥、2型、“隱性”糖尿病的早期診斷指標。
2.在糖尿病的治療中, HbA1C是評價血糖控制好壞的重要標準。
3.預示微、小血管并發癥,估價糖尿病慢性并發癥的發生與發展情況。
糖化血紅蛋白的幾種不同檢測方法
測定GHb主要是利用GHb和Hb的物理化學性質的不同而進行的,目前主要的檢測方法有5種:
離子交換高效液相色譜分析法- 檢測糖化血紅蛋白HbA1c的金標準
基于Hbb鏈N末端纈氨酸糖化后所帶電荷不同而建立。在中性pH條件下,HbA1c攜帶的正電荷相對較少,因此可通過HPLC法將其與其它組分(HbA1c,HbA1b,
HbA1a,HbF,HbA0)區分開,得到分離。此方法曾應用于美國DCCT的研究,是目前檢測HbA1c的金標準。
(2)微柱法
微柱內的陽離子交換樹脂(如Biorex 70)在PH近7時解離后帶陰電荷,而Hb解離后帶陽電荷,二者可形成離子鍵。由于GHb的陽電荷比HbA少,與樹脂的結合力相對低,容易被洗脫。用分光光度計分別測定洗脫液中GHb和溶血物中總Hb的吸光率(A),可計算出GHb占總Hb的百分比(%)。但此方法的影響影響因素比較多:
1. 洗脫溫度對結果有較大影響
2. 抗凝劑肝素能使測定結果增高
3. 某些血紅蛋白如HbF異常增加時,也會與糖化血紅蛋白同時洗脫,從而使結果產生偏差
(3) 電泳法
膠體顆粒在一定條件下可以帶有電荷,帶有電荷的膠體顆粒可以借靜電吸引力在電場中泳行,帶正電荷者泳向負極,帶負電荷者泳向正極,此種現象稱為電泳。血清中各種蛋白質都有它特有的等電點,各種蛋白質在各自的等電點時呈中性狀態,它的分子所帶正電荷與所帶負電荷量相等。但此方法學的弱點是:
1. 需成批進行樣本分析,速度比較慢,無法進行實時檢測
2. 自動化程度低,急診插入、自動維護等功能比較欠缺。
(4)親和層析法
利用生物高分子能與相應的專一配基分子可逆結合的原理將配基通過共價鍵牢固地結合于固相載體上制得親和吸附系統。帶有雜質的高分子分離目的物在一定條件下,能以某種次級鍵與已固相化的配基結合,而雜質則不吸附,除去雜質后變換條件,又可以使待分離的高分子物質重新解離,獲得純化。
除葡萄糖外,血液中所有的糖類都可與Hb相結合,因此該方法的檢測結果為糖化血紅蛋白總量,而不是HbA1c的含量。
(5) 免疫法
使用單克隆或多克隆抗體直接測定血紅蛋白β-鏈上糖基化的N末端的4-8個氨基酸,因此對HbA1C上的糖基特異性好。
但是許多同源的糖化血紅蛋白變體也有相同的N末端結構,從而會對結果造成干擾。在定標方面,需與HPLC作相關校正。
綜合現在臨床實驗室中常用的GHb測定方法,因為原理的不同,測定的結果準確度、重復性都有所差異。相信隨著對HbA1c實驗方法標準化的重視和提高,HbA1c項目的檢測在臨床會得到越來越多的應用。