測試方法摸索
當選擇合適的色譜柱時，不同基體顆粒(雜化、硅膠、聚合物)的特性差別，會造成保留性能、選擇性的差別，了解這一點是很重要的。根據基質表面殘余的硅醇基團數量的不同以及封端原因，可能會導致次級效應，另外不同的鍵合相可導致顯著的選擇性差別以及其它特性。
不同配體、不同選擇性
·疏水性
- 更長的烷烴鏈提供更長的保留時間。
·硅醇活性
- 影響譜峰對稱性和次級效應。
·水解穩定性
- 顆粒鍵合位點上配體數量越多，色譜柱壽命越長。
·配體密度
- 影響樣品負載能力。
用傳統的HPLC設備對具有不同pH值和有機改性劑的大量色譜柱進行摸索試驗需要大量時間，而使用安裝了ACQUITY UPLC 色譜柱管理器和填充了亞-2微米顆粒的高分辨率短色譜柱的ACQUITY UPLC?設備，可使試驗從幾天縮短到幾小時。
色譜柱摸索試驗：使用安裝了ACQUITY
UPLC 色譜柱管理器和ACQUITY
UPLC色譜柱的ACQUITYUPLC設備測試摸索條件如圖所示，圖示這些條件的最終目標是得到一系列不同的色譜圖，其能提供選擇合適色譜柱所需信息。BEH
C18色譜柱是非常好的通用C18，適于寬pH值范圍使用，BEH Shield RP18為烷烴鏈C18提供選擇性補充，BEH
Phenyl色譜柱為這兩種C18色譜柱提供選擇性補充，為了滿足極性保留的試驗設計需求，也可選用HSS T3色譜柱。
pH 值的影響
·影響帶如下可電離基團等的被測物。
- 胺
- 羧酸
- 酚
·有的化合物帶一個或更多可電離基團
·pH值變化可產生最強的選擇性效果