紫外分光光度法如何繪制苯酚標準曲線

一、實驗目的 

1、掌握紫外光譜法進行物質定性、定量分析的基本原理；

 2、學習紫外可見分光光度計的使用方法。

 二、實驗原理 

含有苯環和共軛雙鍵的有機化合物在紫外區有特征吸收。物質結構不同對紫外及可見光的吸收具有選擇性。其中，最大吸收波長λ、摩爾吸收系數ε及吸收曲線的形狀不同是進行物質定性分析的依據。 

由于在λmax處吸光度A有最大值，在此波長下A隨濃度的變化最為明顯，方法的靈敏度最大，故在紫外分光光度計上作苯酚水溶液（試液）的吸收光譜曲線，再由曲線上找出λmax，據此對物質進行定量分析。 用紫外分光光度計進行定量分析時，若被分析物質濃度太低或太高，可使透光率的讀數擴展10倍或縮小10倍，有利于低濃度或高濃度的分析，其方法原理是依據朗伯-比耳定律：A=εbc。 

三、主要儀器與試劑 

主要儀器：美析紫外可見分光光度計UV-1300;UV-1500；1cm石英吸收池2個；50mL比色管5支；5mL、1支；吸耳球1個。 試劑：苯酚標準溶液：100mg/L；

 四、實驗步驟 

 (1)、分析溶液的配制 

取5支50mL的比色管，用移液管分別準確加入0.5mL、1mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL濃度為100mg/L的苯酚標準溶液，用去離子水稀釋至25mL刻度，搖勻。實驗數據記錄于標準表中。 

(2)、確定最大吸收波長 

   取稀釋后濃度為8 mg/L的苯酚標準溶液，在紫外-可見分光光度計上，用1cm石英吸收池，去離子水作參比溶液，在200~330nm波長范圍內進行掃描，繪制苯酚的吸收曲線。在曲線上找出λmax1、λmax2。 

 (3)、標準曲線的制作 

   各濃度的苯酚標準溶液，用1cm石英吸收池，去離子水作參比溶液，在選定的最大波長下，按順序從低至高濃度依次測量各溶液的吸光度，實驗數據記錄于標準表中。以吸光度對濃度作圖，作出標準工作曲線。 

五、數據記錄及結果分析 標準曲線圖