紅豆杉(Taxus)屬裸子植物紫杉綱紅豆杉科(Taxaceae)的常綠喬木，共11種，分布于北半球，我國有4種和1個變種［1］。紫杉屬植物中含有的主要抗癌活性成分是以紫杉醇為主的二萜類化合物。隨著研究的不斷深入，黃酮類化合物也顯示出了良好的抗癌效果［2，3］。據報道，紅豆杉中也有著多種黃酮類成分［4，5］，故研究紅豆杉中的黃酮類成分對保護稀有樹種紅豆杉，提高其資源利用率有著積極意義，但有關紅豆杉總黃酮含量測定目前尚未見準確報道。本研究用紫外分光光度法對紅豆杉中的總黃酮進行測定，并進行了方法學的考察，以期為紅豆杉中黃酮類化合物的開發和利用提供科學依據。
1 儀器與試藥
Agilent 1100高效液相色譜儀；HP UV-8453型可見紫外分光光度計；Sartorius Cp3245型天平；KQ-500DE型醫用數控超聲儀；DHG-9140A電熱恒溫鼓風干燥箱；LABOROTA 4000旋轉蒸發儀，LG 10-2.4A離心機。
金松雙黃酮對照品（自制，HPLC純度>95%）；甲醇為色譜純。其余試劑均為分析純。藥材為云南紅豆杉（Taxus yunnanensis Cheng et L.K.Fu）的枝葉采自云南大理云龍縣，經南方醫科大學生藥學教研室鑒定。
2 方法與結果
2.1 對照品溶液的配制 金松雙黃酮為紅豆杉中生理活性較好的黃酮類成分，故以此作為總黃酮測定中的對照品較具有代表性。精密稱取干燥至恒重的金松雙黃酮2 mg，置50 ml容量瓶中，加甲醇30 ml，超聲振蕩使溶解，放冷至室溫，甲醇定容至刻度，搖勻，得濃度為40 μg/ml的對照品儲備液。
2.2 供試品溶液的配制 準確稱取紅豆杉藥材粉末1 g，加石油醚25 ml，超聲提取30 min，抽濾，重復提取1次, 濾液棄去。藥渣揮干石油醚殘液, 加甲醇25 ml，超聲提取30 min，抽濾，重復兩次，濾液合并濃縮, 置10 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，搖勻。
2.3 最大吸收波長的選擇取對照品溶液和提取溶液進行波長掃描，對照品與供試品溶液在272 nm附近處吸收較強，故選擇272 nm作為測定波長。
2.4 標準曲線的繪制 精密量取金松雙黃酮對照品溶液0.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 ml, 分別置于10 ml容量瓶中，甲醇定容至刻度。用紫外-可見分光光度計于272 nm處測定吸光度值, 以吸光度(A)對濃度(C)進行線性回歸，得回歸方程：
C=1.55+29.16A，r=0.999 2，在12～28 μg/ml范圍內線性關系良好。
2.5 精密度實驗 取金松雙黃酮對照品溶液5 ml 5份，在272 nm處測吸光度，吸光度平均值為0.576 6，RSD為0.82%，表明該儀器精密度良好。
2.6 重復性實驗 精密稱取藥材樣品1 g 共5份，按照“2.2”項下條件平行實驗,依法處理，在272 nm處測定吸光度。結果，平均含量為5.14%，RSD=2.08%。結果表明，本方法重現性良好。
轉 2.7 加樣回收率實驗 稱取已知含量的藥材約0.2 g共5份，于60℃干燥至恒重，精密稱重，置50 ml磨口錐形瓶中，加入金松雙黃酮對照品10 mg，按照“2.2”項依法處理，測定272 nm處吸光值，以相應試劑為空白，按對照品的回歸方程進行計算處理，回收率平均值為96.04%，RSD為2.7%。
2.8 穩定性實驗 取“2.5”項下5號樣品，于0，10，30，60，90，120 min，測定吸光值，平均值為0.575 8，RSD為3.03%，表明樣品在120 min內穩定性良好。
2.9 測定結果 取3個編號的紅豆杉樣品各3份，分別按“2.2”項下的方法配制成供試品溶液，再各準確吸取0.3 ml于25 ml容量瓶中，甲醇定容至刻度，搖勻，272 nm測定其中總黃酮含量。
3 討論
3.1 樣品前處理方法選擇 為了準確測定樣品，故對提取方法及提取時間分別進行了考察。實驗結果表明，在所考察的回流提取法、超聲提取法、連續回流提取法中,采用超聲提取法對有效成分的提取效果最優。
3.2 對照品的選擇 經文獻檢索，至今沒有發現測定云南紅豆杉總黃酮含量的報道，在以前的實驗工作中，曾經以蘆丁作為測定總黃酮的對照品，蘆丁的最大吸收波長在500 nm左右，但紅豆杉中沒有發現有蘆丁成分的報道。經測定云南紅豆杉樣品的最大吸收波長在272 nm處，而金松雙黃酮在272 nm處也有最大吸收波長，故選擇內源性化合物金松雙黃酮作為測定云南紅豆杉總黃酮的對照品更為合理。
3.3 樣品的選擇 紅豆杉中有多種抗癌成分，其中以紫杉醇為主的二萜類成分效果最為顯著，云南紅豆杉是紅豆杉樹種中含紫杉醇等抗癌成分比較高的樹種，但含量也僅ppm級的含量，且紅豆杉的生長速度特別緩慢，資源較少，故用可再生的枝葉作為材料，在提取紫杉醇為主的抗癌活性成分的同時也開發如黃酮類等有效成分，這樣既可以保護資源，又提高了資源的利用率，甚至開發出的新產品可以降低紫杉醇的昂貴價格及使用時的不良反應，這有待同行的共同努力。
本實驗方法操作簡單易行，結果準確可靠，為紅豆杉中黃酮類化合物的開發利用提供了科學依據。
【參考文獻】
［1］ 吳榜華，孫廣仁，張啟昌. 紫杉屬樹木培育技術及紫杉醇的開發利用問題［J］.吉林林學院學報，1999，2(10):199.
［2］ Kawaii S,Tomono Y,Katase E,et al.Bioscience Biotechnology and Biochemistry［J］.1999,63(5):896.
［3］ 馬 波，李夢龍，周在德，等. 黃酮體化合物抗腫瘤活性的量子化學研究［J］.化學研究與應用, 2002,14(2):149.
［4］ 官 智，蘇鏡娛，曾隴梅，等. 紅豆杉中的非紫杉烷類化合物［J］.熱帶亞熱帶植物學報，2000, 8(2)：182.
［5］ 徐彩霞，梁敬鈺.美麗紅豆杉的化學研究進展［J］.海峽藥學，2003，15（2）：3.
［6］ 王達明，周 云，張裕農，等.不同生長類型云南紅豆杉林木枝葉的紫杉烷含量測定［J］.西部林業科學，2007，26（3）30.