維生素C 是一種對人體極為重要的營養物質，基于維生素C
溶液的最大吸收波長為246nm，因而建立了一種直接用紫外分光光度法測定新鮮蔬菜中維生素C 含量的方法。其線性范圍為1.0~10.0μg
/mL，回歸方程為A = 0.0551C-0.0063，r = 0.9998，檢出限為0.05μg
/mL，樣品回收率為99.9%~101.2%，相對標準偏差RSD<5%，具有操作簡便、準確、快速、檢出限低的特性。用于蔬菜中維生素C
含量的測定，結果令人滿意。
維生素C，簡稱VC，是一種水溶性的維生素，廣泛存在于新鮮蔬菜中，具有防止衰老、潤滑肌膚、增強免疫力等作用，是維持人體正常代謝的必需物質。人體缺乏維生素C
易得壞血癥，所以又稱抗壞血酸，它不能在體內合成產生，只能通過合理的膳食而得到。蔬菜中維生素C 的測定方法較多，目前主要有2 ，6 -
二氯靛酚滴定法、碘量法、2 ，4 - 二硝基苯肼法、螢光分光光度法和電化學法等。這些方法各有其特點，但也大都有一定的局限性:
如有些方法操作繁瑣、費時、苛刻，有些方法則有所需儀器造價高的缺陷。本文在有關文獻的基礎上，基于維生素C 在紫外光譜246
nm波長處有一最大吸收峰，進而通過標準曲線法建立了一種蔬菜中維生素C 含量的測定方法，與其它方法相比，具有操作簡便、準確、快速、檢出限低的優點。
儀器與試劑
752 型紫外-可見分光光度計;PHS -3 C 型酸度計;組織搗碎機; 高速離心機;100 mL 容量瓶;1000mL容量瓶;10 mL
吸量管;10 mL 移液管。維生素C 儲備液( 1.0mg / mL ) : 秤取0.1g (準確至0.1mg ) 維生素C，用少量2%
偏磷酸溶解后轉移至100mL 容量瓶中，用偏磷酸稀釋至刻度，搖勻，即為貯備液，存放于冰箱中; 維生素C 標準溶液( 0.1mg / mL )
:將上述儲備液稀釋10 倍后即得0.1mg/mL的維生素C標準溶液;2% 偏磷酸溶液;所有試劑均為分析純。
標準曲線的繪制
用吸量管分別移取0.00、1.00、2.00、4 .00、6.00、8.00、10.00 mL 含維生素C 0.1mg / mL 的標準溶液于7 個潔凈、干燥的100mL 容量瓶中，用2% 偏磷酸溶液稀釋至標線，搖勻。以蒸餾水為參比，在λmax = 246 nm處，用1cm石英比色皿測其吸光度，并以吸光度A 為縱坐標，維生素C 濃度C 為橫坐標繪制標準曲線。
試樣的測定
取一定量的新鮮蔬菜，沖洗干凈，加等量2% 偏磷酸溶液，用組織搗碎機搗碎成勻漿，取適量勻漿轉至1000mL 的容量瓶中，加2% 偏磷酸稀釋，搖勻。在1000 r / min 的高速離心機中離心10 min ，移取離心管上層清液10.00mL，用2% 偏磷酸溶液稀釋定容100mL容量瓶。以蒸餾水為參比，在λmax = 246 nm 處，用1cm 石英比色皿測試樣吸光度。
最大吸收波長的確定
維生素C 是六碳的多羥基內酯，是含有烯二醇基的化合物，在紫外光區范圍內有吸收。取一定濃度的維生素C 溶液至1 cm 的石英比色皿中，以蒸餾水為參比，在200~380 nm 波長范圍內進行掃描，測定最大吸收波長為246 nm(λmax =246 nm) ，結果如圖1 所示。
圖1.維生素C 的紫外吸收光譜
溶劑的選擇
維生素C 溶液在空氣中尤其是堿性條件下容易被氧化而變得極其不穩定，為此，樣品的前處理至關重要。因為偏磷酸、草酸能夠較好地抑制維生素C 的氧化酶，防止維生素C 被氧化而起穩定作用，所以加入偏磷酸、草酸可以解決體系中維生素C 的穩定性問題。實驗發現草酸在波長246 nm 處有較強的吸收峰，不適合處理維生素C 處理溶液，而偏磷酸在波長246 nm 處
無明顯無吸收。因此，本實驗選擇偏磷酸作為紫外分光光度法的溶劑。
體系酸度對吸收的影響
保持其它條件不變的前提下，加入一定的鹽酸或氫氧化鈉溶液，改變體系酸度，考察其紫外光譜的影響，結果發現pH 小于5 時隨pH 的減小吸光度逐漸減小，很有可能是由于維生素C 在強酸性條件下發生電離而造成的; pH>10 時，隨pH 增大，吸光度值逐漸減小則是由于在堿性環境中容易被氧化，因而不穩定、分解造成的。而pH 值在5~10范圍內時，在最大吸收波長246 nm 處的吸光度值較大且無明顯變化，綜合考慮，實驗不加鹽酸、氫氧化鈉溶液時較好，此時體系pH 值處在5~6.5范圍內。
工作曲線、回歸方程及檢出限
圖2. 維生素C 的標準曲線
在最佳實驗條件下，加入不同量的維生素C，測其吸光度，繪制工作曲線( 圖2 所示) 。結果表明，維生素C在1.0~10.0μg/ml 范圍內吸光度A 與濃度C 之間符合朗伯—比爾定律，呈良好線性關系。其回歸方程為A=0.0551C-0.0063，r=0.9998，檢出限為0.05μg/ml。
干擾實驗
對常見的共存組分進行了干擾實驗，結果表明8mg/100g的維生素C存在下，相對誤差控制在±5%以內時，允許的共存物的量為: 果糖8mg、葡萄糖8mg、檸檬酸4mg 及Na2 CO3、KCl、Mg SO4、NaHCO3各3mg。因此，本法具有較好的選擇性，一般蔬菜中存在的物質對實驗測定結果無明顯影響。
樣品分析
根據實驗測定方法，測定了新鮮蔬菜: 西紅柿、青椒、黃瓜、胡蘿卜、土豆中的維生素C 含量，同時進行加標回收實驗，結果如表1 所示。
表1. 蔬菜中維生素C 含量的測定結果
基于維生素C 在紫外光區有明顯的吸收而建立的蔬菜中維生素C 含量的測定方法的線性范圍為1.0~10.0ug/ml，回歸方程A = 0.0551 C-0.0063，r = 0.9998，檢出限為0.05μg / mL，回收率在99.9% ~101.2% 之間，相對標準偏差RSD<5% 。本實驗方法具有結果準確、檢出限低的特性，測定結果令人滿意，易于推廣。