實驗原理
紅細胞在低滲鹽溶液中,當水滲透其內部達一定程度時,紅細胞發生膨脹、破裂。觀察紅細胞在不同濃度鹽溶液中的溶血程度,可以判斷其對低滲鹽溶液的抵抗力,這種抵抗能力與紅細胞表面積與容積的比值有關,比值小者,紅細胞抵抗力較小,脆性增加。反之抵抗力增大。
實驗方法
材料:
1.171.1mmol/LNaCl溶液、蒸餾水
2.移液管、試管、水浴箱等
方法:
1.取12支試管,分別按下表加入NaCl溶液和蒸餾水,得不同濃度的NaCl溶液。
|
試管號 |
1 |
2 |
3 |
4 |
5 |
6 |
7 |
8 |
9 |
10 |
11 |
12 |
|
171.1 M NaCl溶液(ml) |
0.30 |
0.35 |
0.40 |
0.45 |
0.50 |
0.55 |
0.60 |
0.65 |
0.70 |
0.75 |
0.80 |
0.85 |
|
蒸餾水(ml) |
0.95 |
0.90 |
0.85 |
0.80 |
0.75 |
0.70 |
0.65 |
0.60 |
0.55 |
0.50 |
0.45 |
0.40 |
|
NaCl最終濃度(mmol/L) |
41.0
|
47.9
|
54.7
|
61.6
|
68.4
|
75.2
|
82.1
|
88.9
|
95.8
|
102.6
|
109.4
|
116.3
|
|
(g/L) |
2.4 |
2.8 |
3.2 |
3.6 |
4.0 |
4.4 |
4.8 |
5.2 |
5.6 |
6.0 |
6.4 |
6.8 |
2.每管中加入1滴全血(或者肝素抗凝血),輕輕搖勻,在室溫靜置2h后觀察結果。
3.孵育脆性實驗,先將肝素抗凝全血37℃孵育24h后,再做1.2步檢測。
實驗結果計算
先從高濃度開始觀察,上層溶液出現透明紅色者為開始溶血管,管底紅細胞完全消失者為完全溶血管。
參考范圍:
開始溶血75.2mmol/L-82.1mmol/L(4.4-4.8g/L)NaCl溶液
完全溶血47.5mmol/L-54.7mmol/L(2.8-3.2g/L)NaCl溶液
孵育后
開始溶血82.1mmol/L-88.9mmol/L(4.8-5.2g/L)NaCl溶液
完全溶血54.7mmol/L-61.6mmol/L(3.2-3.6g/L)NaCl溶液
注意事項
1.氯化鈉必須干燥后準確稱量,用前新配。
2.每次試驗應做正常對照,其結果應在正常范圍內,被檢者與正常對照開始溶血管NaCl溶液濃度相差0.4g/L有診斷價值。
3.所有器具要干燥,血標本應直接滴入液體內,混勻時不能用力過大,以避免體外溶血。
4.在白色背景下觀察結果,判斷完全溶血試管時,可低速離心1min后觀察。
5.重度貧血患者紅細胞太少,黃疸患者開始溶血管不易觀察,均可取肝素抗凝血以生理鹽水洗滌后,再用生理鹽水配成50%的紅細胞懸液進行檢測。
6.血液標本應避免用枸櫞酸鹽、草酸鹽和EDTA鹽抗凝血,以防增加離子強度。如用以上抗凝血標本應用洗滌紅細胞進行檢測。