純化測序反應產物實驗

甲酰胺 核酸 寡核苷酸

ABI PRISM 3100Genetic Analyzer 微量離心管 DTR Gel Filtration Cartridges (Edge Biosystems)或相應的真空濃縮儀

一、材料

1.緩沖液和溶液

樣品上樣液

所用的樣品上樣液取決于所用的設備。對于ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer,推薦使用高度脫離子

的甲酰胺（如ABI的Hi-Di-甲酰胺）。

2.核酸和寡核苷酸

在方案3中二、方法、步驟5得到的測序反應產物

3.特殊設備

ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer，微量離心管，DTR Gel Filtration Cartridges(Edge Biosystems)或相應的真空濃縮儀

二、方法

1.從包裝袋中取出所需數目的組裝好的圓筒，仔細檢査，確保圓筒中板模沒有干，如果管中已經沒有多余的液體或是板模已干，加入200ul去離子水，使板模重新水合幾分鐘。

2.將圓筒放于微董離心管中，1360g離心2min(如在采用固定傾角轉子的Eppendorf5415C中4000r/min)。這一步是必需的，否則圓簡中會加入多余水分.

3.取出圓筒，放置到另一個干凈的管中，小心將樣品加入到板模的中間。

4.將圓筒放回到離心機，保持與第一次離心相同的方向，1360g離心1~1.5min。

較短的離心時間則回收率較低，一般為75%~85%,但幾乎可以完全去除沒有結合的染料.較長的離心時間雖然可提高回收率（95%),但是洗脫物中會混有終止染料，導致引物附近的堿基含混不清。

5.洗脫物可在-20°C凍存，也可以用自動測序儀立即分析。

6.在其空濃縮儀中濃縮洗脫物20~30min,不要加熱，由于染料是光敏感的，濃縮時間不宜過長，否則可能導致降解。

7.按照測序儀的說明書，用10ul的上樣緩沖液重懸樣品，上樣董取決于所使用的測序儀，對于ABI PRISM 3100 Genetic Analyzer而言，每個毛細管加1~l.5ul即可。

8.按照測序儀說明書進行電泳分離和樣品分析。