純合克隆篩選
1．融化雜合突變ES細胞，ES/LIF培養液培養，每2～3天傳代，實驗開始把細胞接種到三個100mm鋪有凝膠碟皿中，每皿接種1～2×106細胞。為篩選需用一個以上的ES雜合突變細胞系，因不同細胞系的轉化效率不全相同，另外對檢測細胞表型也需如此。
2．每皿細胞分別加入1.0～2.0mg/ml的G4178（終濃度，pH7.4）；應用neo和hyg基因作為篩選標記效果都很好，用hyg時濃度為1.0～2.0mg/ml的hygromycin-β的ES/LIF培養液。
3．培養細胞7～10天，每天換液，仍用含有適當濃度G418的ES/LIF培養液，培養至出現很多單個克隆為止；如細胞已長滿而未出現單個克隆時，應重復2，并加大G418濃度。
4．按前述雜合突變所述15～21步篩選法進行克隆篩選；在出現有雜交片段表示在純合突變細胞中不存在無改變的靶基因。典型情況下，應有50％為純合的，這是因為此過程是隨機的，個別雜合克隆也可能產生純合克隆。
5．進行Northern分析mRNA，或用免疫吸印分析蛋白質，以確定靶基因是否表達。應是抑活的，即不表達，也不應有正常mRNA或蛋白質。