組織的分離實驗_機械分散法

Hanks

鑷子網篩碟皿吸管注射器培養瓶

一、切割分離法

在進行組織塊培養時，可采用剪切法，一般多剪切成1 mm³大小的塊。

具體操作如下：

1.  無菌切取1 cm³組織一塊，置入青霉素瓶或小燒杯中，左手斜持容器，右手持眼科尖剪或彎剪（剪柄較長為好）伸入容器中，反復剪切組織至1 mm³大小為止（成糊狀）。

2.  用吸管吸取Hanks液把附著在剪刀上的組織小塊沖下，并再補加3~5 毫升Hanks液后，用吸管反復輕輕吸吹沖打片刻，低速離心、去上清、余下組織塊即可用于培養。

3.  剪刀剪切法可能對組織有一定損傷，但操作比較方便。

亦可用手術刀反復切割法，把組織塊放在凹窩玻璃中，兩手各持尖手術刀一把，交錯反復切害割至1 mm³為止。手術刀切割法對組織損傷較小，但在空氣中暴露時間較長，污染機會大些。

以上兩方法都適用于組織塊培養法。

二、機械分散法

某些軟組織如腦、胚胎以及一些腫瘤組織等，可采用機械法進行分散。

常用者有兩種，一是把組織放入注射器針管中壓擠法，二是把組織置于不銹鋼紗網中用鈍物壓取法。

不論用那一種方法，都應把組織塊先剪成小塊后再處理。

其中以壓取法較多用，其程序如下：

1.  清洗

取得組織后，先用BSS洗去表面血污，然后預切成5~10 mm³的小塊，置入不銹鋼網篩中（1 mm 孔徑）；

2.  壓擠

把網篩放在大碟皿上方，一手持網篩柄，另手用無菌度管末端徑輕壓擠組織，使之穿過紗網，然后用吸管吸取營養液把紗網上剩余組織吹洗掉；

3.  反復

用吸管從碟皿中吸出較大組織塊，置入10 μm 篩中，進行再壓擠，方法同2；

4.  鏡檢

被濾過的懸液即可用于培養；可先吸取不許懸液鏡檢，如組織塊過大，可再用20 μm 篩做進一步壓擠，以分散成單個細胞或細胞團；

5.  培養

計數細胞后，接種培養。

1.  機械紗網壓擠濾過法簡便易行，節省時間，但對組織可能有一定損傷。

2.  紗網網眼愈小，所需壓力越大，組織受損越重，故本法僅適用于處理軟組織，對較硬組織和纖維性組織效果不好。