組織和細胞的固定方法

 組織和細胞的固定方法 

固定 的目的是用人為的方法盡可能使組織細胞的形態結構和化學成分保持生活狀態，防止組織細胞死后發生自溶和組織腐敗。固定還能增加組織塊硬度，使其更容易切片，使不同的結構更容易染色。

固定方法有物理固定和化學固定兩類，物理固定可采用空氣干燥（血涂片）、驟冷（在液氮中迅速冷凍）或微波固定等；化學固定有浸潤法（immersion method）和灌流法（perfusion method）。灌流法適用于動物實驗中對缺氧敏感的器官，如神經系統和胃腸等取材。

一、浸潤法

浸潤法是組織化學和免疫 組織化學常用的固定方法，一次要處理許多組織樣品時也多用此法。

預先需估計固定劑的用量，并在取材前配好固定液，分裝于小容器內，在容器上標記組別和取材時間。容器內放人記錄組織類型的紙條，以便包埋時辨認。固定液的用量應是樣品的40倍，以保證組織充分固定。固定時間可根據所選固定液和組織類型而定。

若進行酶組織化學染色，應在4℃短時間固定，固定時間長會導致酶活性減弱，甚至消失。

二、灌流固定法

此法是經血管途徑，將固定液灌注到欲固定的器官內，使生活的細胞在原位及時迅速固定，取下組織之后再浸入相同的固定液內繼續固定。

灌流固定時大動物多采用輸液方式，將固定液從一側頸總動脈或股動脈輸入，從另一側切開靜脈放血，輸入固定液與放血同時進行。固定液的輸人量因個體不同而異，即500―2000ml不等。

小動物多采用心臟主動脈灌流，如大鼠和小鼠，在吸人 深度麻醉情況下，打開胸腔，縱向切開心包膜，并用紗線在動脈弓下打一松結，然后用靜脈輸液針從左心室向主動脈方向刺人，針尖刺人后，隨即將紗線扎緊固定，勿使其移動，再將右心耳剪開放血。在灌注固定液前，先用含抗凝劑的37℃生理鹽水灌流，沖洗血管內的血液，防止血液凝固阻塞血管。抗凝劑常用肝素，劑量為40mg/L沖洗液。肝臟顏色由鮮紅變為淺白色時，即可灌流固定液，灌注速度為5～10ml/min，應在30分鐘內結束灌注并取材，而后將組織浸入相同的固定液中1～3小時。灌流固定對組織結構和酶活性保存較好。