細胞傳代培養技巧

一、原理
    細胞在培養瓶長成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長，同時也將細胞數量擴大，就必須進行傳代（再培養）。
    傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時也是利用培養細胞進行各種實驗的必經過程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經消化后才能分瓶。

    二、材料和試劑
    1、細胞：貼壁細胞株
    2、試劑：0.25％胰酶、1640培養基（含10％小牛血清）
    3、儀器和器材：倒置顯微鏡，培養箱、培養瓶、吸管、廢液缸等

    三、操作步驟

    1、將長滿細胞的培養瓶中原來的培養液棄去。
    2、加入0.5—1ml 0.25％胰酶溶液，使瓶底細胞都浸入溶液中。
    3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置鏡下觀察細胞。隨著時間的推移，原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時將胰酶棄去，加入10ml培養液終止消化。
    觀察消化也可以用肉眼，當見到瓶底發白并出現細針孔空隙時終止消化。一般室溫消化時間約為1—3分鐘。
    4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分到另外兩到三瓶中，實踐培養液塞好橡皮塞，置37℃下繼續培養。第二天觀察貼壁生長情況。
    附：消化液配制方法：
    稱取0.25克胰酶蛋白酶（活力為1：250），加入100ml無Ca2+、Mg2+的Hank’s液溶解，濾器過濾除菌，4℃保存，用前可在37℃下回溫。
    胰酶溶液中也可加入EDTA，使終濃度達0.02％。