1844年米利翁敘述了蛋白質反應，1853年霍夫曼指出，這個反應實際上是一個測定酪氨酸的方法，直至1888年，萊特格爾才開始利用米氏反應進行研究工作。1868年克萊布斯和1872年施特魯韋分別顯示出組織中酶的存在。他們指出樹膠酊遇膿變成藍色，這是確定組織中有過氧化物酶存在的首次報道。
1895年埃爾利希用“納笛”反應首次顯示細胞色素氧化酶。在異色性方面，甲基紫顯示糖蛋白；天竺牡丹顯示肥大細胞、唾液腺粘液；雜硫氧苯染料如亞甲藍、硫堇、亞甲綠、甲苯胺藍、天青藍等對多糖的異色性染色亦相繼被發現。
