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  • 發布時間:2020-08-17 22:39 原文鏈接: 細胞的原代培養實驗

    實驗方法原理

    細胞培養(Cell culture)是模擬機體內生理條件,將細胞從機體中取出,在人工條件下使其生存、生長、繁殖和傳代,進行細胞生命過程、細胞癌變、細胞工程等問題的研究。近年來,廣泛地應用于分子生物學、遺傳學、免疫學、腫瘤學、細胞工程等領域,發展成一種重要生物技術,并取得顯著成就。由體內直接取出組織或細胞進行培養叫原代培養。原代培養細胞離體時間短,性狀與體內相似,適用于研究。一般說來,幼稚狀態的組織和細胞,如:動物的胚胎、幼仔的臟器等更容易進行原代培養。

    實驗材料 胎大鼠

    試劑、試劑盒 1640培養液PBS胰蛋白酶EDTA混合消化液乙醇

    儀器、耗材 手術器械平皿培養瓶吸管離心管煤氣燈燒杯超凈工作臺二氧化碳培養箱倒置顯微鏡

    實驗步驟

    1.  取材

    用頸椎脫位法使胎大鼠迅速死亡。然后,把整個動物浸入盛有75%乙醇的燒杯中數秒鐘消毒,取出后放在大平皿中攜入超凈臺。用消過毒的剪刀剪開用碘酒和乙醇再次消毒后的皮膚,剖腹取出肝臟或腎臟,置于無菌平皿中。

    2.  切割

    用滅菌的PBS 液將取出的臟器清洗三次,然后用眼科手術剪刀仔細將組織反復剪碎,直到成1 mm3 左右的小塊,再用PBS 清洗,洗到組織塊發白為止。移入無菌離心管中,靜置數分鐘,使組織塊自然沉淀到管底,棄去上清。

    3.  消化、接種培養

    吸取0.25%胰蛋白酶一0.02%EDTA 混合消化液1 ml,加入離心管中,與組織塊混勻后,加上管口塞子,37 ℃水浴中消化8~10 分鐘,每隔幾分鐘搖動一下試管,使組織與消化液充分接觸,靜止,吸去上清,向離心管中加入5~10 ml 含10%小牛血清的1640 培養基,用吸管吹打混勻,移入二個培養瓶中,置于二氧化碳培養箱中培養。


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