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  • 發布時間:2019-04-10 12:30 原文鏈接: 細胞的吞噬活動與矽肺發生的形態學觀察實驗

    實驗方法原理高等動物體內存在著具有防御功能的吞噬細胞系,其中粒細胞和單核細胞的吞噬能力最強,故稱吞噬細胞,這些細胞隨血液進入組織后逐漸演變成巨噬細胞。 當機體受到異物入侵時,巨噬細胞在趨化因子的作用下向異物移動,然后伸出偽足包裹異物,將異物吞入細胞內形成吞噬泡,與溶酶體合并成次級溶酶體,通過溶酶體內的酸性水解酶將異物消化分解。

    目前認為肺泡內的巨噬細胞在矽肺的發病過程中起關鍵性作用。當含有SiO2矽塵顆粒被吸入肺部后,被肺泡內的巨噬細胞吞噬,形成吞噬泡,與溶酶體合并后形成次級溶酶體,由于矽塵顆粒中含有SiO2,其表面的羥基與溶酶體膜的磷脂或蛋白質形成氫鍵,從而改變溶酶體膜的穩定性,引起溶酶體膜崩解,水解酶釋放,最后導致巨噬細胞溶解、死亡、而含有SiO2矽塵顆粒釋放,再次被其他巨噬細胞吞噬,如此反復進行。巨噬細胞大量死亡,其死亡時釋放出的致纖維化因子,激活成纖維細胞,導致膠原纖維增生。同時,巨噬細胞死亡時釋放出來的二氧化硅也可作為抗原,刺激免疫活性細胞,產生抗體,抗原抗體反應產生復合物和補體一起,沉積在膠原纖維上,使新形成的結締組織呈透明樣外觀。
    實驗材料

    公雞靜脈血成年小鼠

    試劑、試劑盒

    Alsever溶液生理鹽水淀粉肉湯

    儀器、耗材

    顯微鏡注射器載片蓋片

    實驗步驟

    1、實驗前兩天,每天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉湯1ml(起標記作用),以誘導腹腔產生更多的巨噬細胞。

    2、實驗時,每四個同學取一只經過上述處理的小鼠,腹腔注射1%的雞血細胞懸液1ml。

    3、30min后,再向腹腔注射0.5ml小鼠生理鹽水。

    4、 30min后,頸椎脫位法處死小鼠。

    5、用注射器取腹腔液滴片,蓋上蓋片。

    6、顯微鏡觀察

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    其他

    1. Alsever溶液:葡萄糖2.05g,檸檬酸鈉0.80g,NaCl 0.42g,溶于100ml雙蒸水中。

    2. 6%淀粉肉湯:牛肉膏0.3g蛋白胨 1.0g氯化鈉0.3g臺盼藍(Trypan blue)粉0.3g

    3. 蒸餾水 100ml煮沸滅菌,置4℃冰箱保存。

    4. 小鼠生理鹽水0.85g氯化鈉溶于100m1蒸餾水中

    5. 雞生理鹽水0.75g氯化鈉溶于100m1蒸餾水中

    6. 1% 雞紅細胞懸液自健康雞翼靜脈采血或從集市殺雞處接血2ml(防止污染),放入盛有8ml AlseVer溶液瓶中,混勻置4℃冰箱保存備用(一周內使用)。使用前加入0.85%生理鹽水離心(1 500r/min 10min)洗滌二次,再用生理鹽水配成l%濃度懸液。

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