細胞周期檢測方法（PI法）

可用于細胞周期檢測的熒光染料有碘化丙啶（Propidium，簡稱PI）、4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole，簡稱DAPI)、Hochest、7氨基放線菌素（7-Amino-ActinomycinD，簡稱7AAD）等。

細胞周期PI法原理：

PI法是較常見的一種周期檢測方法。PI是一種雙鏈DNA的熒光染料，與雙鏈DNA結合后可產生熒光，并且熒光強度和雙鏈DNA的含量成正比。細胞內的DNA被PI染色后，可以用流式細胞儀對細胞進行DNA含量測定，然后根據DNA含量的分布情況，可進行細胞周期分析。PI染色后，假設G0/G1期細胞的熒光強度為1，那么含有雙份基因組DNA的G2/M期細胞的熒光強度的理論值為2，正在進行DNA復制的S期細胞的熒光強度為1-2之間。

細胞周期檢測步驟：

1. 細胞樣品的準備：
    收集細胞，用1ml預冷PBS洗1遍，輕輕彈擊離心管底以適當分散細胞，避免細胞成團。
2. 細胞固定：
    加入1ml預冷的70%乙醇中，輕輕吹打混勻，4度固定2小時或更長時間（固定12-24小時可能效果更佳）。1000g離心3-5分鐘，沉淀細胞（如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或加大離心力）。棄上清，用用1ml預冷PBS洗1遍。
3. PI染色：
    每個樣品用0.5ml染色緩沖液（或PBS）重懸，加入25ul PI染色液（20×）、10ul RNase A（50×）。37度避光溫浴30分鐘。
4. 流式檢測：
    用流式細胞儀在激發波長488nm波長處檢測紅色熒光，同時檢測光散射情況。采用分析軟件進行細胞DNA含量分析和光散射分析。