隨著免疫學理論研究的深入,發現的細胞因子日益增多,并在免疫應答的調節和效應中起著重要作用,其在體內水平的高低直接反映機體的免疫狀況。細胞因子檢測的方法主要分三類:①細胞生物學活性檢測法。②免疫學標記技術,常用ELISA。③分子生物學方法,常用逆轉錄PCR檢測細胞因子的mRNA轉錄的情況。現以生物活性法為例選擇性地介紹幾種細胞因子的檢測。
一、人類干擾素的檢測
人類干擾素(humaninterferon,HuIFN)有α、β和γ三種,其中HuIFN-γ由T細胞產生,三種HuIFN都有抗病毒作用,因此可利用檢驗地帶網病毒的各種生物學特性建立相應的檢測方法,如血凝素生成抑制試驗,是以人肺癌細胞株A549作為小鼠腦脊髓心肌炎病毒的敏感細胞,將此病毒接種于A549的單層細胞培養中,可產生使人“O”型紅細胞凝集的血凝素。若在此培養中加入可能含有IFN的血清標本,由于IFN能抑制病毒在細胞中的生長,而使血凝素產生降低,借助“O”型紅細胞的凝集反應判斷IFN的活性。本方法既可定性又可定量。
二、白細胞介素-1(IL-1)的檢測
取肝素抗凝血經分層液(比重1.077)離心分離單個核細胞,配成一定的濃度加入塑料培養板孔中溫育1~3小時,洗去未粘附細胞,然后每孔加入含一定濃度LPS的細胞培養液,繼續溫育一定時間,收集上清液檢測IL-1活性。
IL-1活性最常用的檢測法是小鼠胸腺細胞增殖反應。該法原理:IL-1可輔助ConA或PHA等刺激小鼠胸腺細胞的增殖,增殖細胞的DNA合成增加。在細胞培養結束前6小時加入3H-TdR,待培養結束時收集細胞,檢測放射性強度,即可判斷IL-1活性。由于IL-1能促進小鼠T細胞|檢驗地帶網|傳代株LBRM-33和EL-4分泌IL-2,當含IL-1待檢樣品加入上述細胞培養液,則培養上清IL-2增加,再用IL-2依賴細胞株測定分泌IL-2的多少,可間接推測樣品中IL-1含量。其他IL的生物學檢測方法大致相同,增殖反應細胞常采用IL的依賴株。
三、腫瘤壞死因子(TNF)的檢測
TNF的主要生物學功能是對某些腫瘤細胞具有細胞毒作用。常用于TNF檢測的敏感細胞系為L929細胞,基本方法如下:收集處于對數生長期的L929細胞,經洗滌、計數后調節到適宜濃度,加入至96細胞培養板中,37℃、5%CO2培養16~24小時,換液后在各孔內加入不同稀釋濃度的檢驗地帶網待檢樣本,再加入適量的放線菌素D和培養液,繼續培養16小時左右,加入100μl MTT,培養6小時后,輕輕吸去上清,加入酸化異丙醇,再在570nm波長下測定光密度,其光密度值與TNF細胞毒功能成反比,據此推測樣本中TNF含量。TNF的檢測在某些炎癥、自身免疫性疾病、移植排斥反應、重癥肝炎等疾病的診斷、監測中有一定意義。
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