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  • 發布時間:2020-09-01 16:15 原文鏈接: 細胞培養常見問題與解答3

    15.如何檢測內毒素(熱源)水平?

    LAL(Limulus Amebocyte Lysate)試驗是可用的最敏感和特異的檢測細菌內毒素的方法。Levin和Bang 發現細菌可引起鱟(Limulus polyphemus)血管內的凝集作用。內毒素啟動一個細胞內酶原系統(絲氨酸蛋白酶級聯反應系統),通過修飾凝集素,產生一種透明的膠,LAL中的凝固蛋白,從而,形成不可溶的基質。LAL試劑緩沖的鱟(血細胞)裂解物。

    胎牛血清的內毒素檢測是在Grand Island,按照手冊上Gel-clot 方法進行的。在對血清產品進行內毒素檢測前,用無熱源的水1:10稀釋樣品。稀釋樣品沸水育5分鐘,以消除抑制劑。(通常,血液中的內毒素結合成份的出現會抑制凝膠過程,使內毒素不能與LAL反應。樣品預先熱處理可以消除這種抑制作用。)

    16.我可以使用固體形式的 Murashige Skog 培養基嗎?

    如果使用固體形式的培養基,需要加入瓊脂。瓊脂加入前要先滅菌。應該避免MS培養基的直接滅菌,應該高壓滅菌瓊脂溶液,然后把融化的瓊脂溶液加入到MS培養基中。

    17.20℃下配制的緩沖液,在較高或較低的溫度下PH值會改變嗎?

    對于普通使用的緩沖液,PH值隨溫度變化而變化。

    下表列出溫度改變10℃時,PH值的變化情況

    例如 20℃下配制PH7.4 Tris緩沖液,40℃時PH值為 7.4-(2x0.310)=6.78

    緩沖系統 pKa/20℃ [Delta]pKa/10℃

    Mes 6.15 -0.110

    Ada 6.60 -0.110

    Pipes 6.80 -0.085 Aces 6.90 -0.200

    Bes 7.15 -0.160

    Mops 7.20 -0.013

    Tes 7.50 -0.200

    Hepes 7.55 -0.140

    Tricine 8.15 -0.210

    Tris 8.30 -0.310

    Bicine 8.35 -0.180

    Glycylglycine 8.40 -0.280

    18.室溫下(25℃)配制的Tris-HCl溶液,在37℃使用時PH值是多少?

    緩沖液的PH值隨溫度變化而變化。下表列出了50mM Tris-HC 溶液在4℃,25℃,37℃時,不同的PH值。

    4℃ 25℃ 37℃

    8.1 7.5 7.2

    8.2 7.6 7.3

    8.3 7.7 7.4

    8.4 7.8 7.5

    8.5 7.9 7.6

    8.6 8.0 7.7

    8.7 8.1 7.8

    8.8 8.2 7.9

    8.9 8.3 8.0

    9.0 8.4 8.1

    9.1 8.5 8.2

    9.2 8.6 8.3

    9.3 8.7 8.4

    9.4 8.8 8.5

    19.昆蟲細胞培養的最適PH值和滲透壓是多少?

    生長培養基的PH值對細胞的增值和病毒或重組蛋白的生產均會產生影響。對于大部分鱗翅類昆蟲細胞系,在PH值 6.0-6.4范圍的大部分應用效果良好。培養鱗翅類昆蟲細胞系時,培養基的最適滲透壓是 345-380mOsm/kg.。為保證可靠和持久的細胞培養方式,減少技術問題,保持PH值和滲透壓在以上所列的范圍之內。

    20.High Five細胞有任何其它名稱嗎?

    High Five細胞也被稱為Trichoplasia ni 5B1-4和BTI-TN-5B1-4。

    21.PFHM-II 和HYBRIDOMA-SFM之間有什么差別?

    PFHM-II (Protein-free Hybridoma Medium)是不包含有蛋白質的單克隆抗體生產培養基。如果作為雜交瘤生產培養基使用,PFHM-II可能需要補充低水平的血清。HYBRIDOMA- SFM即是雜交瘤生產培養基,也是單克隆抗體生產培養基。它包含低水平的蛋白質。
    22.在High Five無血清培養基中去污劑的濃度是多少?

    High Five無血清培養基中去污劑的濃度:0.025 g/L Tween-80,1.0 g/L Pluronic Poly-all。

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